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蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及功能预测被引量：8: 2016年; 蓝舌病病毒（bluetongue virus,BTV）编码4种非结构蛋白（NS1~NS4）,其中NS4是新发现的非结构蛋白。为深入探索该新型非结构蛋白的功能,本研究首先采用生物信息学分析其序列结构特征及可能的功能域,结果发现NS4蛋白的N端α-螺旋结构域中具有富含碱性氨基酸的核定位信号（NLS）,而C端α-螺旋结构域中具有亮氨酸拉链结构的核输出信号（NES）。为进一步证实NS4的亚细胞定位,本试验构建了表达NS4全长及其缺失突变体的重组质粒,结果显示缺失NLS的NS4重组蛋白弥散在胞浆,而缺失NES后NS4重组蛋白只定位于细胞核,表明NS4蛋白亚细胞定位具有核—胞浆穿梭过程。最后结合3D同源建模发现NS4与CCAAT增强子结合蛋白（C/EBPβ）等具有较高的同源性,据此推测NS4可能为转录调控蛋白,与DNA或其他转录因子存在相互作用。总之,本研究为NS4蛋白的功能研究提供了更多新线索和新思路,填补了BTV基础研究的空白。; 吕爽杨涛孙恩成徐青元张继凯吴东来; 关键词：蓝舌病病毒亚细胞定位同源建模

蓝舌病病毒衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定: 2016年; 蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)的结构主要由3层衣壳蛋白组成,其中VP2、VP5蛋白构成了BTV的外层衣壳,VP7蛋白构成了BTV的中间衣壳,最内层衣壳则由VP3蛋白构成。VP2、VP5及VP7蛋白在BTV侵染宿主细胞的过程中起着非常重要的作用。为了研究BTV与宿主细胞相互作用的分子机制,本研究将BTV的VP2、VP5、VP7基因分别克隆到pGBKT7载体中,成功构建了pGBKT7-VP2、pGBKT7-VP5与pGBKT7-VP7 3个诱饵质粒,且通过自激活和毒性验证,证明所构建的3个质粒均无自激活作用,对酵母细胞无毒性作用。本研究为今后利用酵母双杂交筛选VP2、VP5、VP7蛋白中与宿主细胞相互作用的蛋白做好了铺垫,为深入研究BTV与宿主细胞的相互作用奠定了基础。; 张继凯孙恩成杨涛徐青元吕爽王海秀张沁吴东来; 关键词：蓝舌病病毒自激活作用

蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测: <正>研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒BTV引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病。NS4是新发现的BTV的一种非结构蛋白,位于S9基因上,与VP6的ORF相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具有非...; 吕爽杨涛徐青元孙恩成张继凯吴东来; 文献传递

鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选: 2013年; 为筛选减毒肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)菌株,本研究以含有Mini-Tn5转座子的重组自杀质粒pUT对S.enteritidis SM6株进行转座诱变,利用双亲本滤膜杂交方法与供体菌E.coliβ2155进行接合转移,构建并优化接合转移体系,利用卡那抗性和DAP营养缺陷培养平板筛选法构建了SM6的随机转座突变体库。其中包含5个子库,共计获得364株突变体,经PCR鉴定表明转座子均插入SM6株的基因组中。通过Caco-2细胞侵袭试验筛选S.enteritidis侵袭力减弱并在细胞内增殖受到抑制的减毒突变株,经初筛及验证最终获得3株稳定减毒菌株,为进一步研究减毒菌株突变毒力基因的定位及SM6株的侵袭及感染机制奠定了基础。; 吕爽朱婷王秀梅刘慧芳司微于申业陈利苹刘思国; 关键词：肠炎沙门氏菌转座子突变体库

蓝舌病病毒15型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定被引量：1: 2015年; 为制备抗蓝舌病病毒(BTV)15型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV15VP2蛋白的MAb(2D6)。通过western blot和间接免疫荧光试验对该MAb进行特异性鉴定。结果显示,其仅能够识别BTV15,而不能识别其他血清型BTV以及同种属的中山病毒和茨城病毒,表明该MAb具有良好的反应特异性。利用肽扫描技术对该MAb针对的B细胞表位进行鉴定,确定该MAb识别的抗原表位为15IAPAIIK RYP24。本研究为BTV15特异性抗原检测方法的建立奠定了基础。; 张沁孙恩成徐青元杨涛王海秀冯瑜菲李俊平吕爽吴东来; 关键词：VP2蛋白单克隆抗体抗原表位

蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测: 研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒BTV 引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病.NS4是新发现的BTV 的一种非结构蛋白,位于S9 基因上,与VP6 的ORF 相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具...; 吕爽杨涛徐青元孙恩成张继凯吴东来

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吕爽