吴志慧
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学化学工程更多>>
- 增殖细胞核抗原反义核酸联合5-FU抑制肝癌细胞生长
- 2008年
- 目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义寡核苷酸(ASODN)联合5-FU对离体肝癌细胞及小鼠肝癌生长的抑制作用。方法:用5-FU、5-FU联合PCNA ASODN、5-FU联合聚乙烯亚胺(PEI)介导的PCNA ASODN(PEI-ASODN)分别转染人肝癌SMMC-7721细胞,改良MTT法(WST法)分析细胞生长增殖抑制效果;建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,腋下移植瘤模型小鼠,隔日给药共5次,第13天杀小鼠,观察小鼠瘤重、瘤体积改变;腹水瘤模型小鼠,连续腹腔注射给药7次,记录小鼠平均存活天数,绘制小鼠存活曲线。结果:5-FU联合PEI-ASODN时,5-FU对肝癌细胞的IC50降低为0.165μg/mL,肝癌细胞对5-FU敏感性提高了49.7倍;肝癌腋下移植瘤小鼠各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以5-FU联合PCNA反义核酸组最高;对于腹水瘤小鼠,以5-FU和PCNA反义核酸联合治疗组平均生存时间最长。结论:5-FU联合PEI-ASODN能有效抑制肝癌细胞增殖,抑制小鼠肝癌的生长,延长小鼠存活时间。
- 吴志慧蒋建伟陈涛陈超丁文婷陈妙巧
- 关键词：肝癌反义核酸增殖细胞核抗原5-氟尿嘧啶
- 蛋白激酶Cα反义核酸诱导肺癌A549细胞凋亡被引量：1
- 2009年
- 目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法以PEI介导PKCαASODN转染A549细胞,设空白对照组、PEI组、PEI-ASODN组(PKCαASODN终浓度分别为1.25、1.50μmol/L),通过Hoechst33258染色和电镜检测,观察细胞凋亡的形态学改变;设空白对照组、PEI组、PEI-随机寡核苷酸(RODN)组(RODN终浓度1.50μmol/L)、PEI-ASODN组(PKCαASODN终浓度分别为1.00,1.25,1.50μmol/L),采用PI单染和AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术,检测细胞亚二倍体峰和早期凋亡率。结果Hochest33258染色和电镜检测均可见PKCαASODN转染组细胞有核固缩、边集和裂解等凋亡形态学变化。流式细胞术示:PKCαASODN转染组细胞出现了明显的亚二倍体峰和早期凋亡细胞群,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),并呈浓度依赖性效应。结论PEI介导的PKCα反义核酸能诱导A549细胞凋亡。
- 严玉霞蒋建伟黄志宏林春兰吴志慧吴风云
- 关键词：蛋白激酶CΑ反义核酸A549聚乙烯亚胺
- PKCα反义核酸对肺癌A549细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞生长增殖及PKCα基因表达的影响。方法以PEI介导PKCα ASODN,随机寡核苷酸(RODN)分别转染A549细胞,采用WST法和克隆形成抑制实验分析细胞生长增殖抑制效果;RT-PCR检测PKCα mRNA的表达水平;Western blotting检测PKCα蛋白的表达水平。结果PEI介导的PKCα ASODN转染A549细胞后,细胞生长增殖和克隆形成均受到抑制(P
- 严玉霞蒋建伟黄志宏吴志慧林春兰吴风云
- 关键词：蛋白激酶CΑ反义核酸A549聚乙烯亚胺
- 医学生物化学实验教学探索被引量：7
- 2009年
- 生物化学实验是训练学生掌握生物化学基本知识和基本技能的重要手段,本文就如何提高生物化学实验教学质量进行了探讨。
- 严玉霞林春兰吴志慧
- 关键词：医学生物化学实验教学
- 白花地胆草单体EM-12诱导2774-C10细胞G1/S期阻滞及细胞凋亡的分子机制研究被引量：5
- 2018年
- 目的：研究白花地胆草（Elephantopus mollis H.B.K.）的乙醇提取物EM-12抗肿瘤作用分子机制。方法：MTT检测EM-12对卵巢癌细胞活性影响;克隆形成抑制实验检测EM-12对卵巢癌细胞增殖能力的影响;GO功能分析（gene ontology analysis）分析EM-12对卵巢癌2774-C10细胞的影响;PI单染检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting检测细胞凋亡、周期相关蛋白。结果：MTT实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的活性;RNASeq及GO功能分析表明EM-12诱导2774-C10发生G1/S期阻滞;克隆形成抑制实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的增殖;流式细胞术结果表明,随着药物浓度的增加,凋亡率逐渐增加,并且G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例减少,发生G1/S期阻滞。Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加cyclin E2、cyclin D1、CDK2、CDK6蛋白水平下降,并伴随caspase-8、caspase-3活化及多聚ADP核糖聚合酶PARP酶切失活。结论：EM-12诱导卵巢癌细胞发生G1/S期阻滞,且通过死亡受体通路诱导细胞凋亡。
- 黄翔杨杰何佩彦吴志慧曾慧兰王新宁蒋建伟
- 关键词：卵巢癌凋亡
- 水飞蓟宾通过上调 P15INK4B 和 P21WAF1／CIP1活化 JNK 诱导人胰腺癌细胞 G1期阻滞及细胞凋亡被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05),水飞蓟宾作用于As PC-1细胞48、72 h的IC50浓度分别为224.20、87.25μmol/L;克隆形成抑制实验显示,随着水飞蓟宾浓度增加,As PC-1细胞克隆形成逐渐减少.细胞周期检测结果显示,随着水飞蓟宾浓度的增加,胰腺癌As PC-1细胞出现明显G1期阻滞;水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1表达下降,细胞周期蛋白激酶CDK4、CDK6表达不变,细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达升高,与流式检测的结果相一致.不同浓度水飞蓟宾作用48 h后,出现明显的凋亡细胞群;同时发现Caspase-9、Caspase-3活化降解,Caspase3下游效应蛋白PARP出现切割条带.JNK蛋白表达增加并磷酸化活化,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,BH3-only蛋白Bclxs、Bid、Bim表达增加.结论:水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖,通过诱导P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在G1期,并通过诱导JNK活化激活线粒体细胞凋亡途径,进而诱导胰腺癌As PC-1细胞凋亡.
- 王莉张晓凯张鹏王娟娟吴志慧林晨蒋建伟
- 关键词：水飞蓟宾胰腺癌细胞
- 槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究被引量：13
- 2009年
- 目的研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/mL的槐耳清膏和10μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用于SGC-7901细胞,分别于24 h和48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48 h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系(P<0.05);槐耳清膏6 mg/mL组的抑制率48 h后达到(77.9±2.3)%,5-Fu组为(53.4±1.6)%,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测显示,槐耳清膏4 mg/mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33.2%;6 mg/mL组早期凋亡细胞6.3%,而晚期凋亡细胞为19.9%。RT-PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调。结论槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。
- 吴志慧蒋建伟曹明溶陈涛张小鹰吴风云
- 关键词：槐耳清膏胃癌凋亡生存素
- 靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸抑制消化系肿瘤细胞增殖效果的差异被引量：9
- 2010年
- 目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1的反义核酸和随机序列反义核酸(randomolig odeoxynucleotide,RODN),采用脂质体Li-pofectamineTM 2000转染细胞,WST法检测相同浓度的5种ASOs对肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞的增殖抑制作用和致凋亡作用。结果 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,不论是对细胞增殖抑制还是致凋亡作用,均以Bcl-xlASO、Mcl-1ASO的作用效果较好。结论在Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,Bcl-xlASO、Mcl-1ASO可明显抑制消化系肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。
- 蒋建伟吴风云何金花廖晓莉王威吴志慧
- 关键词：反义核酸BCL-2BCL-XLMCL-1
- DNA快速提取联合家兔α胶原Ⅷ型基因PCR扩增综合性实验的探讨
- 2010年
- 以微量标本的chelex-100 DNA提取方法,联合PCR扩增技术设计开发成一个综合性实验为例,阐述了该实验方案,分析其取得的实验效果,进而对生物化学综合性实验教学进行初步探讨。
- 吴志慧刘誉费嘉林春兰严玉霞周羽竝
- 关键词：生物化学DNA提取PCR扩增
- 聚乙烯亚胺介导的生存素反义核酸提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)介导的生存素(survivin)反义核酸(antisense-oligonu-cleotides,ASODN)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、三氧化二砷(arsenic trioxide)或羟基喜树碱(hydroxy-camptothecine,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。方法:单独应用不同浓度的5-FU,As2O3,HCPT,或这些药物分别与survivin ASODN或PEI-ASODN联合应用,作用于SMMC-7721细胞,采用WST-8法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,并计算药物作用的IC50。以金正均的概率和法进行协同作用分析。结果:不同浓度的5-FU,As2O3或HCPT联合PEI-ASODN(ASODN终浓度为0.125μmol/L)均明显降低这些化疗药物的IC50,提高SMMC-7721细胞对5-FU,As2O3或HCPT的敏感性,增敏倍数分别为36.1、4.16、18.8。金正均Q值法分析表明,5-FU,As2O3或HCPT与PEI-ASODN联合使用,均表现出协同作用。结论:PEI介导的低浓度的生存素反义核酸可提高人肝癌细胞SMMC-7721对5-FU,As2O3和HCPT的敏感性,PEI介导的生存素反义核酸与5-FU联合的作用效果最佳。
- 严玉霞蒋建伟曹明溶吴志慧林春兰丁文婷陈妙巧
- 关键词：生存素反义核酸化学治疗聚乙烯亚胺
