孙聪
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
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- 相关领域：农业科学生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 小菜蛾中肠Polycalin基因克隆及其功能分析
- [目的]小菜蛾Plutella ylostella (Linnaeus)是一种世界性范围内广泛分布的十字花科蔬菜重要害虫.Bt毒素的作用机理是与昆虫中肠上的刷状缘膜蛋白受体结合,形成寡聚化的结构,在中肠细胞膜上形成穿孔,...
- 孙聪杜潇展恩玲赵爱平刘同先李怡萍
- 关键词：小菜蛾BT克隆功能分析
- Cry1Ac毒素对小菜蛾幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响被引量：6
- 2017年
- 为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观察中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的变化,分析Cry1Ac毒素与昆虫中肠酶活性间的关系。结果表明,小菜蛾幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl、KH_2PO_4/NaOH和Glycine/NaOH三种缓冲液中最适pH均为11.0;强碱性胰蛋白酶的最适pH分别为10.0、10.5和10.5;弱碱性胰蛋白酶的最适pH均为8.5;胰凝乳蛋白酶的最适pH分别为8.5、9.0和9.0。Cry1Ac毒素对小菜蛾的致死中浓度LC_(50)为0.343μg/mL。用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后,其中肠各蛋白酶活性均随时间的变化而变化。弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性明显升高,且随浓度升高呈上升趋势;在取食36~72 h期间低浓度处理组的羧酸酯酶活性与对照组间无显著差异,而高浓度处理组羧酸酯酶活性显著高于对照组。表明Cry1Ac毒素能够显著影响小菜蛾的中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性。
- 赵爱平展恩玲孙聪刘同先李怡萍
- 关键词：小菜蛾蛋白酶羧酸酯酶酶活性
- 蛋白酶抑制剂对梨小食心虫幼虫中肠蛋白酶活性的影响被引量：15
- 2016年
- 【目的】梨小食心虫Grapholitha molesta(Busck)是一种危害极其严重的果树害虫。中肠蛋白酶在昆虫生长发育过程中起着重要作用。本研究测定梨小食心虫幼虫中肠内蛋白酶活性的最适p H、蛋白酶抑制剂和激活剂对蛋白酶活性的作用,为利用蛋白酶抑制剂防治该害虫提供新思路。【方法】提取梨小食心虫3龄幼虫中肠液,利用酶专性底物测定各蛋白酶在3种不同缓冲溶液中的最适p H(dd H2O为对照)、蛋白酶抑制剂和激活剂对中肠蛋白酶活性的影响,同时测定饲喂蛋白酶抑制剂(PMSF,TLCK,TPCL和STI)后梨小食心虫中肠蛋白酶活性的变化。【结果】梨小食心虫幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl,KH2PO4/Na OH和Glycine/Na OH 3种缓冲液中最适p H分别为10.5,11.0和11.0,强碱性胰蛋白酶的最适p H分别为10.5,11.0和11.0,弱碱性胰蛋白酶的最适p H分别为8.5,9.0和9.0,胰凝乳蛋白酶的最适p H分别为8.5,9.0和9.5。5种蛋白酶抑制剂(DTT,PMSF,TLCK,TPCL和STI)中,除TLCK对凝乳蛋白酶激活外,其他蛋白酶抑制剂对4种蛋白酶均表现为抑制,且浓度越大抑制效应越明显。抑制剂DTT对总蛋白酶和弱碱性胰蛋白酶的抑制效果高于其他抑制剂。4种蛋白酶激活剂(Mg Cl2,Ca Cl2,EDTA和EGTA)中,Mg Cl2抑制总蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性,而激活胰蛋白酶活性;Ca Cl2激活总蛋白酶和弱碱性胰蛋白酶活性,而抑制强碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,EDTA对4种蛋白酶均表现为抑制,EGTA除对强碱性胰蛋白酶表现为激活外,对另外3种蛋白酶表现抑制。用蛋白酶抑制剂PMSF,TLCK,TPCL和STI饲喂梨小食心虫幼虫,各抑制剂均可抑制4种蛋白酶活性,且在不同取样时间抑制水平不同。其中STI(50μg/m L)对4种蛋白酶的抑制效果高于其他抑制剂,且浓度越大抑制效应越明显。10,20和50μg/m L STI 3种浓度处理组,在取食后4 h时,4种蛋白酶活性升高,且上升程度与STI浓度有关;酶活性在20μg/m L
- 赵爱平孙聪展恩玲仵均祥李怡萍
- 关键词：梨小食心虫蛋白酶最适PH蛋白酶抑制剂酶活性
- 梨小食心虫越冬场所调查及性诱剂诱捕距离初探被引量：3
- 2016年
- 运用圈间调查和性诱剂诱捕方法，对陕西杨凌地区梨园、桃园的梨小食心虫越冬场所和性诱剂诱集的有效距离进行研究。结果表明，自然条件下，梨小食心虫主要以老熟幼虫集中在树干周围0～1．0m范围内的土壤中越冬，越冬最适深度为0～3．0cm；在树体上，其越冬主要集中在0～60．0cm高度的翘皮、裂缝中，且越冬虫量随位置高度增高而减少；不同品种果树上越冬虫量以毛桃树上最多，梨树上最少；树龄越大，管理水平越差，越冬虫量越多。梨小食心虫性诱剂最佳诱集距离为15～20m，诱集量在梨园中最多。
- 赵爱平孙聪展恩玲何林师仵均祥李怡萍
- 关键词：梨小食心虫越冬性诱剂
- 小菜蛾中肠Polycalin蛋白的基因克隆、表达及与Cry1Ac毒素的结合特性分析被引量：2
- 2017年
- 【目的】Polycalin蛋白是一种新发现的Bt毒素受体,可能与昆虫对Bt的抗性有关。本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella Polycalin蛋白与Bt Cry1Ac毒素的关系。【方法】本研究通过PCR结合RACE技术从小菜蛾3龄幼虫中肠克隆获得Polycalin蛋白基因的全长cDNA序列,采用实时定量PCR技术研究Polycalin蛋白在小菜蛾不同发育阶段、4龄幼虫不同组织及用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂3龄幼虫后的表达量。提取小菜蛾幼虫中肠的刷状缘膜囊泡(BBMV),运用合成多肽的方法制备Polycalin蛋白抗体,利用Western blot和Ligand blot技术对小菜蛾Polycalin蛋白进行鉴定,分析其与Cry1Ac毒素的结合特性。【结果】克隆得到的小菜蛾Polycalin蛋白基因的cDNA序列全长为9 102 bp(GenBank登录号:MF138149),其中,开放阅读框为8 778 bp,编码2 925个氨基酸;预测蛋白质分子量为326.38 kD,等电点为4.39;在推导的氨基酸序列中,前20个氨基酸为N-末端信号肽序列,含有14个N-糖基化位点,67个O-糖基化位点,6个脂质运载蛋白特征序列,6个脂质运载蛋白位点和13个类脂质运载蛋白结构域,并且在第20和21位(TSG-QVV)氨基酸之间存在一个裂解位点,在C-末端存在2个GPI结合位点,具有Bt毒素受体的特征。该蛋白在幼虫期的表达量较高,尤其在3龄幼虫体内表达量最高,在蛹和成虫中的表达量最低;在4龄幼虫的头、胸、腹中均有表达,在幼虫腹部中的表达量最高;3龄幼虫取食不同浓度的Cry1Ac毒素后,Polycalin蛋白的表达量下降,且Cry1Ac毒素浓度越高,下降越明显。通过Western blot检测到小菜蛾中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)上存在大约300 kD的Polycalin蛋白条带;Ligand blot实验证明了小菜蛾Polycalin蛋白能与Cry1Ac毒素结合。【结论】本研究首次初步明确了小菜蛾Polycalin蛋白具有与Bt毒素结合的特性,为研究Bt对昆虫的作用机理和利用Bt防治害虫提供一定的理论基础和参考价值。
- 展恩玲杜潇赵爱平赵爱平孙聪李怡萍
- 关键词：小菜蛾BT毒素基因克隆基因表达
- Bt毒素对小菜蛾和梨小食心虫中肠蛋白酶活性的影响
- [目的]为了明确Bt毒素对小菜蛾Plutella xylostella和梨小食心虫Grapholita molseta两种鳞翅目昆虫幼虫中肠内丝氨酸族蛋消化白酶活性的影响.[方法]本研究分别用不同浓度Bt毒素(Cry1A...
- 赵爱平孙聪展恩玲李怡萍
- 关键词：小菜蛾梨小食心虫蛋白酶
- 粘虫在中国西部越冬北界探讨被引量：2
- 2021年
- 粘虫每年会在越冬区和非越冬区进行季节性的往返迁飞,20世纪60年代将粘虫在中国东部地区的越冬北界确定为33°N,但其在西部地区越冬的相关信息一直未见报道。为确定粘虫在中国西部33°N能否越冬,于2015年至2018年在中国西部33°N附近的汉中、安康及杨凌3个地区设置观察点展开调查。每年11月将室内饲养的粘虫末龄幼虫放置在观察点进行笼罩试验,12月至翌年3月定期调查粘虫的存活率。结果表明:自12月至翌年3月,粘虫在3个地区的越冬存活率呈下降趋势。自2016年至2018年每年的3月份,汉中地区粘虫的最高存活率分别为:3.77%±0.80%,2.33%±0.60%,0.17%±0.17%;安康地区分别为:4.00%±0.38%,1.83%±1.01%,1.83%±0.12%;杨凌地区分别为:0,0.15%±0.04%,0.63%±0.08%。并且在越冬结束时,汉中地区成功羽化的最高粘虫成虫数量分别为8头、9头、1头;安康地区分别为9头、8头、4头;杨凌地区分别为0头、1头、2头。初步认为:粘虫在中国西部33°N附近的陕西地区零星个体可以顺利越冬。同时首次探明粘虫在中国西部地区的越冬界限可能在33°N以北。
- 周靖华高其琴刘雪莹刘雪莹孙聪孙聪仵均祥仵均祥
- 关键词：冬季气温
- 陕西地区粘虫越冬北界、体内抗寒物质变化及相关基因表达量研究
- 粘虫Mythimna separata是一种危害严重的多食性、暴食性、迁飞性农业害虫，每年由越冬区向非越冬区之间季节性往返迁飞习性是造成近年来在局部地区突然暴发成灾的主要因素。我国在20世纪六七十年代就确立了粘虫在我国东...
- 孙聪
- 关键词：粘虫基因表达量生理生化
- 文献传递
- 蛋白酶抑制剂对梨小食心虫中肠蛋白酶活性的影响
- [目的]梨小食心虫Grapholitha molesta是一种危害极其严重的果树害虫,中肠消化蛋白酶在昆虫生长发育过程中起着重要作用.本研究测定梨小食心虫幼虫中肠内蛋白消化酶活性的最适pH、蛋白酶抑制剂和激活剂对蛋白消化...
- 赵爱平孙聪展恩玲仵均祥李怡萍
- 关键词：梨小食心虫最适PH蛋白酶抑制剂活性
