尹荣华
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：北京放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GPS2基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞的永生化及其增殖凋亡的检测被引量：1
- 2016年
- 目的利用SV40大T抗原(SV40LT)过表达慢病毒建立永生化的GPS2野生与敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)系,并检测GPS2敲除对MEF增殖及凋亡的影响。方法构建p CDH-Flag-SV40LT-GFP慢病毒表达载体,并进行病毒包装。分离胚胎发育9.5 d(E9.5d)的MEF细胞,感染SV40LT慢病毒,连续传代培养50代以上,把仍存活且状态良好的GFP阳性细胞视作永生化成功的MEF细胞。利用高内涵细胞成像分析仪检测永生化MEF细胞的增殖情况,采用AnnexinⅤ/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功构建p CDH-Flag-SV40LT-GFP慢病毒表达载体,获得滴度为4.03×108pfu/ml的病毒。分离E9.5d MEF细胞并感染上述病毒,阳性细胞扩大培养并稳定传代50代以上,成功建立了永生化的MEF细胞系。GPS2敲除MEF细胞的增殖能力明显低于野生型,而二者由于血清撤除所引起的凋亡并无明显差异。结论敲除GPS2抑制MEF细胞的增殖。
- 田欢欢任广明詹轶群杨晓明尹荣华
- 关键词：成纤维细胞永生化细胞增殖
