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人α-磷酸丙酮酸水合酶原核表达载体的构建及蛋白纯化被引量：1: 2016年; 目的构建带PET-28a标签的人ENO1基因原核表达产物,观察其表达并纯化出带PET-28a标签的ENO1融合蛋白,为研究肿瘤糖酵解的相关机制奠定实验基础。方法以人乳腺文库为模板,利用PCR技术扩增出ENO1基因编码片段,将其插入到PET-28a载体中,鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rossate,小量诱导表达后,利用PET-28a-琼脂糖凝胶4B亲和珠纯化PET-28a-ENO1融合蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western印迹检测,获得纯度较好的PET-28a-ENO1蛋白。结果利用PCR技术从乳腺文库中扩增得到大小约1300 bp的目的基因片段,插入PET-28a载体中,经双酶切鉴定及测序,结果表明PET-28a-ENO1质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化得到相对分子质量(Mr)约为57×103的目的蛋白。结论成功获得了人糖酵解相关基因ENO1的原核表达产物,为进一步研究ENO1在糖酵解过程中的作用机制奠定基础。; 宋烨琼董倩梁迎春李玲洪甜晋帅徐小洁叶棋浓吕朝晖; 关键词：磷酸丙酮酸水合酶原核表达纯化糖酵解

人M2型丙酮酸激酶促进肾癌细胞生长: 2015年; 目的:构建带myc标签的人M2型丙酮酸激酶(PKM2)的真核表达载体,并瞬时转染肿瘤细胞,初步探讨PKM2的生物学功能。方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增PKM2基因,将其插入p XJ-40-myc载体,双酶切和基因测序验证后转染人胚肾293T细胞,Western印迹验证表达;将重组基因和空载体分别转染人肾透明细胞癌Caki-1细胞,CCK8法测定并绘制细胞生长曲线。结果:从人乳腺文库中获得长约1500 bp的DNA片段,连接到p XJ-40-myc载体上,测序结果与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后获得表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-PKM2的Caki-1细胞生长较空载体细胞快。结论:构建了myc-PKM2真核表达载体,为进一步研究PKM2在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。; 梅国徽麦海星梁迎春张柯郭靖李玲董倩洪甜徐小洁叶棋浓陈立军; 关键词：克隆真核表达肾癌细胞

携带Flag标签的人自噬相关蛋白4B的真核表达及功能鉴定: 2016年; 目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B(ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pc DNA3.0-Flag载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用Western印迹检测融合蛋白的表达,用免疫共沉淀检测ATG4B与LC3的相互作用。结果:菌液PCR和重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,免疫共沉淀结果表明表达的ATG4B能与LC3结合。结论:构建了pc DNA3.0-Flag-ATG4B真核表达质粒,表达的ATG4B蛋白对LC3的切割至关重要。; 洪甜晋帅张立李玲梁迎春宋烨琼董倩刘阳徐小洁叶棋浓; 关键词：真核表达 LC3 自噬

人KAT7基因促进雌激素受体α表达被引量：1: 2016年; 目的:构建带有Myc标签的赖氨酸乙酰基转移酶(KAT7)的真核表达载体,获得Myc-KAT7融合蛋白,并检测其对雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术从中扩增出人KAT7基因的编码序列,插入p XJ-40-Myc载体;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测转染细胞的表达情况,并提取总RNA采用q RT-PCR检测ERα的表达。结果:双酶切和测序结果表明Myc-KAT7真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后Western印迹鉴定表明融合蛋白得到表达,q RT-PCR表明KAT7在转录水平能够促进ERα表达。结论:构建了带Myc标签的人KAT7真核表达载体,并发现KAT7对ERα的表达具有促进作用。; 董倩李玲宋烨琼范忠义张珂徐小洁叶棋浓胡毅; 关键词：克隆真核表达雌激素受体Α

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董倩