目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c及其靶基因ZEB1/2的表达变化.方法应用LPS 3次打击的方法构建小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型,分别于造模后第3、7、14、21天处死小鼠,留取肺组织备用.各组小鼠肺组织切片行HE和Masson染色并在光学显微镜下观察病理改变;Real-time PCR检测肺组织miR-200b、miR-200c、ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA表达;Western blot检测肺组织ZEB1、ZEB2、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达.结果 (1)病理结果:与对照组相比,LPS处理后第3天肺组织胶原纤维开始沉积,随着时间延长,肺纤维化程度逐渐加重;(2)Real time-PCR结果:随着肺纤维化程度加重,miR-200b、miR-200c水平均呈下降趋势,第7、14、21天时均显著低于对照组(P<0.01);ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA水平呈上升趋势,且ZEB2 m RNA较ZEB1 m RNA表达增加更显著;(3)Western blot结果:随着急性肺损伤后肺纤维化的进展,ZEB1、ZEB2蛋白表达亦升高,与其m RNA表达变化相一致;上皮标志物E-cadherin蛋白表达逐渐减少,间质标志物Vimentin、α-SMA蛋白表达逐渐增多.结论在LPS诱发急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c表达降低,并通过负性调控其靶控基因转录抑制因子ZEB1/2的表达促进上皮向间质转化.
目的建立脂多糖(LPS)介导的大鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型并观察其过程中血管紧张素系统主要组分血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和Mas受体的变化趋势。方法分别由腹腔和气道内间断3次注射LPS建立大鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型,并于末次注射后第3、7、14和21日处死大鼠,取肺组织及血浆。H-E染色和Masson染色观察肺组织形态结构改变;ELISA试剂盒检测血浆中TGF-β的水平;RT-q PCR及Western blotting检测肺组织中AT1R和Mas m RNA和蛋白表达变化。结果经LPS复合打击后,大鼠肺组织病理改变在第3日以肺部炎症反应为主要表现,而第7日后炎症减弱,肺组织正常形态结构遭到破坏,Masson染色提示胶原纤维沉积逐渐增加,血浆中TGF-β的含量逐渐升高(P<0.01),从而形成早期肺纤维化。另外,随着LPS诱导肺纤维化的发展,AT1R m RNA表达无显著变化,但其蛋白表达在第14日及21日明显增加;肺组织内Mas m RNA表达逐渐增加,至第21日明显升高至对照组的15倍,而Mas受体蛋白的表达在第14日及21日明显下调至对照组的30%(P<0.01)。结论 LPS复合多次打击能有效建立大鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型,且随着肺纤维化发展,AT1R/Mas受体呈上升/下降相反的表达变化。
