王思民
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小菜蛾颗粒体病毒PP31与两种宿主蛋白发生相互作用被引量：1
- 2012年
- 在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒。其编码产物是一种磷蛋白,与病毒基因表达调控相关。本研究通过酵母双杂交实验从小菜蛾幼虫cDNA文库中筛选出两个与PlxyGV PP31相互作用的蛋白质基因。序列分析结果显示这两个基因的预期编码产物分别是小菜蛾蛋白激酶C受体(RACK)和一种甲硫氨酰氨肽酶2(MetAP2)同源蛋白。原核表达和蛋白质纯化实验结果显示,rack与6-组氨酸编码序列的融合基因的表达产物是一个38kD多肽。在GST-pulldown实验中,RACK蛋白随同GST-PP31融合蛋白一起吸附于GST亲和树脂,进一步证实了小菜蛾RACK蛋白与PlxyGV PP31发生相互作用。
- 刘攀峰王思民刘音黎路林
- 关键词：小菜蛾颗粒体病毒
- 小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
- 2013年
- 杆状病毒PP31是一种磷酸化的DNA结合蛋白。pp31基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。用PCR方法从小菜蛾颗粒体病毒基因组扩增pp31基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导,在被转化菌株中表达产生出携带6×His标签的PP31蛋白。用ProBondTM树脂纯化的His-PP31融合蛋白大小约29 kD左右。用该融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得PlxyGV PP31蛋白抗血清。Western blot分析显示,所获得的抗血清具有较强的特异性和高效价,可应用于PlxyGV PP31蛋白分析。
- 王思民张鸿杰黎路林
- 关键词：小菜蛾颗粒体病毒原核表达多克隆抗体
