田波
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国科学院西双版纳热带植物园更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院重点实验室基金中国科学院西部之光基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 蓖麻三磷酸甘油脱氢酶基因(RcGPDH)的克隆及功能分析被引量：3
- 2011年
- 为了阐明蓖麻三磷酸甘油脱氢酶基因(glycerol-3-phosphate dehydrogenase,RcGPDH)在蓖麻油累积过程中的作用,本研究根据已报道的蓖麻种子表达序列标签(Expressed Sequence Tags,EST)设计引物,通过RACE(rapid-amplification of cDNA ends)方法克隆蓖麻RcGPDH基因的全长并对其序列进行分析,构建了该基因的酵母表达载体pYES2.1/V5-His-TOPO-RcGPDH,以载体pYES2.1/V5-His/lacZ质粒DNA为对照,转化酵母野生型菌株BY4742,运用分光光度法测定转基因酵母的生长曲线,通过香草醛法测定稳定生长期的转基因酵母的油脂含量。结果表明,转基因菌株比转空载体对照菌株生长慢,两者均在培养18h后进入平台期;两个菌株的油脂含量没有明显的差别,表明RcGPDH基因对酵母油脂的累积没有起到积极的作用,在蓖麻种子中可能还存在另一个GPDH同源基因参与三脂酰甘油(TAG)的合成。
- 弭宪杰徐荣华刘爱忠吴丁田波
- 关键词：蓖麻
- 小桐子磷脂二酰甘油酰基转移酶(JcPDAT1) cDNA的克隆与功能鉴定被引量：9
- 2013年
- 使用简并PCR结合RACE技术从能源植物小桐子种子中克隆了一个PDAT基因的cDNA全长,命名为JcPDAT1(GenBank登陆号为HQ827796)。JcPDAT1全长2 869bp,包含一个长为2 013bp的开放阅读框,编码670个氨基酸。多序列比对和进化分析表明该基因编码蛋白与其他植物PDAT高度同源,具有典型的PDAT结构域。Realtime PCR结果表明JcPDAT1在种子、叶和根里面都有表达,且在种子发育过程中大量表达。酵母互补实验证实该基因编码蛋白具有PDAT酶活性。在与酿酒酵母突变体H1246α的互补实验中发现,TLC层析(薄层层析法)和尼罗红染色结果都显示JcPDAT1的表达使H1246α恢复合成TAG,说明JcPDAT1具有PDAT的功能活性。
- 徐荣华邱丽俊阳天泉王如玲田波刘爱忠
- 关键词：小桐子简并PCR基因克隆荧光定量PCR
