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铁皮石斛硫氧还蛋白基因(DoTrxL2)的克隆及表达分析被引量：3: 2018年; 运用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛硫氧还蛋白超家族基因(Thioredoxin like 2,DoTrxL2)。序列分析表明DoTrxL2基因开放阅读框(ORF)长度为639 bp,编码213个氨基酸,编码产物含有一个硫氧还蛋白家族保守的CXXC功能结构域,通过两个半胱氨酸的双硫键得失电子,起到氧化还原作用。分子进化分析显示,DoTrxL2同小兰屿蝴蝶兰、石刁柏亲缘关系较近。qRT-PCR分析显示,DoTrxL2在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有表达差异,其中在原球茎形成早期表达量较高,表明该基因对原球茎形成有着促进作用;而在种子和花中表达量高,表明该基因对植物组织的生殖发育具有重要调控作用。; 范静毛欢刘楚琪龙涛周康王万军; 关键词：铁皮石斛 RACE 实时荧光定量PCR

铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24的克隆及表达分析被引量：7: 2016年; 目的:克隆铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24,预测其蛋白结构特征和进化关系,分析其时空差异表达情况,并推测其在植物生长发育中的功能。方法:提取铁皮石斛全苗总RNA,采用cDNA末端快速扩增(RACE)和巢式PCR技术克隆Do UBC24基因;用生物信息手段分析基因序列结构特征,并预测其编码蛋白及其理化性质和亚细胞定位;用MEGA6.0构建系统发育树,分析物种进化关系;用qRT-PCR检测DoUBC24在原球茎不同发育时期及不同组织中的相对表达量。结果:克隆得到基因全长为3811 bp,包含2880 bp的CDS,编码959个氨基酸残基,编码产物含有一个保守的UBCc结构域;分子进化分析显示,DoUBC24同海枣、油棕、小果野芭蕉、玉米、短花药野生稻、二穗短柄草和大麦等单子叶植物的亲缘关系较近;qRT-PCR分析显示,DoUBC24在铁皮石斛叶原基维管系统形成、原球茎退化时期表达显著下降,而在椭球形原球茎、根端分生组织和类原球茎中表达量较高,在组织中的表达量水平依次为花>茎>种子>根>叶。结论:铁皮石斛泛素结合酶DoUBC24基因在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有显著的差异表达,可能对原球茎发育及植物组织的形态建成具有重要调控作用。; 安红强范静梁易裴薇王万军; 关键词：铁皮石斛泛素结合酶 CDNA末端快速扩增 QRT-PCR

铁皮石斛多聚泛素基因Polyubiquitin1(DoUb1)的克隆及表达分析被引量：5: 2017年; 采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术获得铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)Polyubiquitin1(DoUb1),该基因全长1985 bp,开放阅读框为1371 bp,编码457个氨基酸残基的亲水性蛋白,分子质量为51 179.7 ku,理论等电点p I为7.76;亚细胞定位分析表明该基因产物主要在细胞质或线粒体基质中发挥作用。DoUb1与水稻、玉米及谷子等单子叶植物的多聚泛素基因亲缘关系较近。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析结果显示,DoUb1在铁皮石斛幼苗根和叶中表达量较高,茎中表达量较低;在干旱胁迫和温度胁迫过程中的表达量都低于正常状况,在干旱胁迫的早期,表达量降低,6 h时达到最低,之后随胁迫时间的延长而缓慢升高;在温度胁迫情况下,DoUb1具有与干旱胁迫相近的响应特性,但低温胁迫相比高温胁迫下,DoUb1表达量更低,表明该基因对低温胁迫更敏感,结果为后期研究铁皮石斛生长发育提供一定基础。; 裴薇梁易范静安红强王万军; 关键词：RACE 铁皮石斛 POLYUBIQUITIN RT-QPCR

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范静

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