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抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2017年; 为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。; 邸晶美顾文源左玉柱罗尚星刘宝京申小强代飞范京惠; 关键词：猪流行性腹泻病毒单克隆抗体 S蛋白

不同药物对树突状细胞捕获猪细小病毒样颗粒的影响被引量：2: 2016年; 通过磁性筛选的方法从猪的脾脏分离树突状细胞(DC),经低渗和钾离子缺乏处理或与氯丙嗪、二甲基氨基吡咪、松胞素D、菲律平等药物分别在37℃下作用1h后,再与荧光素FITC标记的猪细小病毒样颗粒(FITC-PPVVLPs-E290)在37℃下作用4h,应用流式细胞仪检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。结果显示:钾离子缺乏及氯丙嗪对DC的捕获效率无影响,而经二甲基氨基吡咪、菲律平、及松胞素D处理的DC对PPV-VLPs-E290捕获效率明显下降。结果表明:DC对PPV-VLPs-E290的捕获与肌动蛋白及巨胞饮、小窝蛋白介导的方式有关,而与网格蛋白介导的方式无关。; 邸晶美左玉柱申小强顾文源刘宝京罗尚星代飞常嫣嫣孔园园范京惠; 关键词：病毒样颗粒树突状细胞

河北省猪圆环病毒病流行情况调查与分析: PCV2能够引起母猪和仔猪发病，严重制约着中国养猪业的发展，本文利用PCR方法，设计引物。对2015年9月到2016年12月期间采集河北山西不同地区的73份疑似猪圆环病毒病(PCVD)病料进行检测，在河北省收集到68份疑...; 代飞; 关键词：猪圆环病毒病流行病学抗体阳性率

影响猪树突状细胞对猪细小病毒样颗粒提呈方式的因素被引量：1: 2017年; 旨在探明猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs)被猪脾树突状细胞(DC)捕获后,被提呈的方式。首先通过磁性筛选的方法从非免疫猪和免疫猪的脾分离CD172a+CD11R+DC及CD4-CD8+T细胞。DC分别与伯氨喹、放线菌酮、氯喹、乳胞素、布雷菲德菌素A及亮抑肽酶、胃酶抑素等作用1h后,再与细小病毒样颗粒PPV-VLPs-E290在37℃作用4h,应用CD8+T细胞的细胞毒性分析检测DC对PPV-VLPs-E290的提呈情况。乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测结果显示,伯氨喹及亮抑肽酶对DC提呈PPV-VLPs-E290的效率无明显影响,胃酶抑素部分抑制,而氯喹、放线菌酮、布雷菲德菌素A及乳胞素则可使DC提呈PPV-VLPs-E290的效率明显下降。结果表明,DC通过交叉提呈的方式提呈PPV-VLPs-E290。晚期内体的酸性环境以及蛋白酶的水解均参与了PPV-VLPs-E290的提呈过程。; 罗尚星申小强顾文源范京惠邸晶美刘宝京代飞孔园园常嫣嫣左玉柱; 关键词：病毒样颗粒树突状细胞

LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型的建立被引量：4: 2017年; 为建立LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型,通过分离、培养奶牛蹄真皮细胞,用不同浓度的LPS处理蹄真皮细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测CYP3A4、CYP1A1mRNA的表达,Western blot法检测CYP450蛋白的表达,并通过ELISA法检测细胞上清液中TNF-ɑ、IL-1β的含量,来确定LPS是否对细胞造成损伤。结果表明,随着LPS浓度的升高,对蹄真皮细胞的损伤也随之升高,CYP450蛋白的表达呈升高的趋势,在10μg/mL时表达最明显,10μg/mL LPS处理48h,对CYP3A4、CYP1A1mRNA表达的抑制作用较明显,模型组TNF-ɑ和IL-1β的含量极显著高于对照组(P<0.01)。本试验表明,10μg/mL LPS作用48h可建立可靠的蹄真皮细胞炎症模型。; 田梦悦刘宝京代飞侯海婷秦建华马玉忠; 关键词：LPS 奶牛炎症模型

保定市及周边地区圆环病毒2型免疫情况调查: 2016年; 从保定市周围9个已免疫过猪圆环病毒2型疫苗的不同规模大小的猪场,共采集431份血清,其中,阳性抗体的血清数为266份,抗体阳性率为62.18%。阴性血清的血清数为113份航体率为26.22%。可疑血清数为50份,占收集血清的11.6%。由此可以得出,保定市周边猪场的圆环疫苗免疫情况不理想。; 代飞范京惠左玉柱邸晶美刘宝京罗尚星李清艳

副猪嗜血杆菌、PCV2及PRRSV多联RT-PCR检测方法的建立及其应用被引量：1: 2018年; 副猪嗜血杆菌（H．parasuis）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原，根据GenBank中这3种病原的基因组序列，选择基因序列的高保守区，分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR，并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法，对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测，并随机选择其中的57份，同时进行单一PCR检测，以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明，3对引物能特异扩增出大小分别为469，829，219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明，H．parasuis，PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52．7，335．0，137．0Pg。412份临床样品检测结果显示，H．parasuis在2012年的阳性率为44．2％，2013年为45．1％，提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是H．parasuis。; 罗尚星范京惠刘宝京邸晶美代飞常彦嫣孔园园左玉柱; 关键词：副猪嗜血杆菌猪圆环病毒2型多重RT-PCR

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代飞