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刘希佳

作品数：6 被引量：8H指数：2
供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
发文基金：国家自然科学基金科技基础性工作专项更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 4篇克隆
  • 4篇病毒
  • 3篇蛋白
  • 2篇多克隆
  • 2篇多克隆抗体
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇抗体
  • 2篇核表达
  • 2篇CDNA克隆
  • 1篇蛋白基因
  • 1篇血小板
  • 1篇血小板减少
  • 1篇药物
  • 1篇药物筛选
  • 1篇药物抑制
  • 1篇耶尔森菌
  • 1篇原核表达
  • 1篇鼠疫
  • 1篇鼠疫耶尔森菌

机构

  • 6篇中国科学院
  • 3篇新疆大学
  • 2篇武汉大学
  • 2篇新疆维吾尔自...
  • 1篇南开大学
  • 1篇新疆疾病预防...

作者

  • 6篇刘希佳
  • 3篇孙素荣
  • 3篇邓菲
  • 2篇沈姝
  • 2篇刘万红
  • 2篇张渝疆
  • 1篇郭荣
  • 1篇李轶杰
  • 1篇何小华
  • 1篇刘海舟
  • 1篇李江

传媒

  • 1篇海南医学院学...
  • 1篇生物技术
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇中国病原生物...
  • 1篇疾病预防控制...
  • 1篇中国病毒病杂...

年份

  • 1篇2022
  • 2篇2020
  • 1篇2018
  • 2篇2015
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
鼠疫耶尔森菌重要功能蛋白caf 1抗原表位的精细定位
2018年
目的完成鼠疫耶尔森氏菌重要功能蛋白caf 1的精细线性抗原表位鉴定。方法利用DNA重组技术获得重组蛋白rcaf 1,免疫新西兰兔制备抗rcaf 1多克隆抗体;使用DNA Star-protean软件及生物网站http://www.cbs.dtu.dk/services/Signal P/预测rcaf 1的抗原表位,并通过基因工程技术获得连接KLH载体蛋白的多肽;使用ELISA方法鉴定预测的精细抗原表位。结果对鼠疫耶尔森氏菌重要功能蛋白caf 1预测的精细线性抗原表位,经ELISA法检测,其中多肽片段P1为弱阳性、P2为阳性,具有较好的免疫原性。结论针对鼠疫耶尔森菌重要功能蛋白caf 1抗原表位的预测是准确的,为鼠疫潜在诊断靶点及新型疫苗的选择提供了可靠依据。
郭荣阿布力米提.莫明刘希佳孙素荣
关键词：鼠疫耶尔森菌CAF抗原表位
古尔图病毒重组截短糖蛋白基因的表达及抗体的制备
2020年
目的:原核表达古尔图病毒(Guertu virus,GTV)糖蛋白截短片段(Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2),分别纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白并制备其多克隆抗体。方法:采用RT-PCR的方法分别扩增得到GTV DXM毒株截短糖蛋白Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2基因片段,并将其构建到原核表达载体pET-32a(+)中,继而转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白质大小。经镍柱亲和层析纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白,用GTV阳性羊血清通过Western blot法检测重组蛋白的抗原性。用纯化的蛋白质分别免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA法检测血清效价。将构建的真核表达载体pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2转染至哺乳动物Vero细胞,并用间接免疫荧光法评估前述制备的兔多克隆抗体的结合活性。最后用Western blot法检测血清与重组蛋白的特异性反应能力。结果:双酶切鉴定和测序结果表明pET-32a-Gn、pET-32a-Gn1/Gn2/Gn3、pET-32a-Gc1/Gc2、pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2重组表达载体构建正确,重组表达蛋白Gn-His、Gn1/Gn2/Gn3-His、Gc1/Gc2-His相对分子质量(Mr)大小分别约为63.4×103、37.1×103、31.9×103、30.8×103、40×103和54.4×103。重组表达蛋白能够被GTV阳性羊血清所识别;获得的抗GTV Gn、Gc1和Gc2兔多克隆抗体效价分别为1∶409600、1∶204800和1∶6400。间接免疫荧光检测和Western blot结果表明制备的多克隆抗体能够与真核表达产物或重组蛋白发生特异性反应。结论:重组GTV糖蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His得到了高效表达和纯化,具有较好的免疫性。制备的多克隆抗体效价高,特异性好。本研究结果为进一步开展GTV糖蛋白生物学功能及其检测方法和疫苗研究提供参考资料。
阿依排日·阿布拉沈姝张敬媛刘希佳李轶杰邓菲张渝疆孙素荣
关键词：糖蛋白原核表达真核表达
Dhori病毒核蛋白基因的重组表达及其抗体制备被引量：2
2020年
[目的]表达和纯化Dhori病毒(DHOV)核蛋白(NP),并制备多克隆抗体。[方法]RT-PCR扩增NP基因,并克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体peDNA3.1中。将重组质粒pET-28a-NP转化至大肠杆菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NP(rNP)的表达并亲和层析纯化rNP,以抗DHOV阳性羊血清检测其抗原性,免疫新西兰免制备抗血清,以ELISA法检测其效价。将pcDNA3.1-NP转染至Vero细胞,以间接免疫荧光法评估抗体的结合活性,WesternBlotting检测抗体与重组蛋白的特异性反应能力。[结果]pET-28a-NP和peDNA3.1-NP重组质粒构建正确,原核表达的rNP约为55.3kDa,并能被阳性羊血清识别,制备的抗体效价为1:409600,能特异性识别真核及原核表达产物。[结论]成功表达和纯化rNP,并制备了多克隆抗体,可用于深入研究DHOV核蛋白的生物学特性及其检测试剂。
刘振明沈姝阿布力米提·莫明史深刘希佳丁军涛邓菲张渝疆孙素荣
关键词：核蛋白真核表达多克隆抗体
肠道病毒71型武汉分离株(EV71-WH029)全基因组cDNA克隆及序列分析被引量：6
2015年
目的对肠道病毒71型武汉分离株（EV71-WH029）进行全基因组克隆、序列测定及分析,了解其基因组结构和遗传进化特征,并初步探索EV71毒力相关位点。方法采用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap extension PCR得到WH029全基因组cDNA克隆;cDNA片段测序后利用BioEdit 4.8.8和MEGA 5.2.2等软件进行序列分析和遗传进化分析;采用Fisher＇s exact test进行编码区氨基酸变异位点的统计分析;采用RNAfold服务器进行非编码区二级结构分析。结果 WH029分离株基因组全长7 406nt（未包含多聚腺苷酸尾）,5′-和3′-UTR分别为743nt和81nt,中间为一个全长6 582nt开放阅读框（ORF）,编码一个长度为2 194aa的多聚蛋白,编码区无核苷酸的缺失或插入;该毒株与安徽阜阳株EU703813及上海株JQ736684的核苷酸及氨基酸序列同源性均最高（分别为97.53%-100%和97.41%-99.73%）,系统进化分析也表明该毒株与以上两株的亲缘关系最近;编码区氨基酸序列分析发现有7个位点变异。非编码区的二级结构预测提示,该区域的核苷酸位点变异与毒力无直接相关性,而与地域有相关性。结论 WH029分离株全基因组结构符合EV71病毒特征,经序列比对及进化分析证实WH029分离株属于EV71C4a基因亚型,并推断该株可能来源于2008年安徽HFMD疫情。对不同临床症状的EV71毒株序列的比较分析提示,EV71毒力与编码区单一位点的突变及非编码区二级结构的变异无直接相关性,可能与多位点突变共同作用及患者的个体差异相关。
李江刘希佳刘海舟刘万红
关键词：肠道病毒71型
一种新的柯萨奇病毒A组16型中国湖北分离株(CV-A16WH16)全基因组序列测定及分析
2015年
目的对分离自2010年中国湖北手足口患者的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)病毒WH16株进行全基因组克隆、序列测定及进化分析。方法利用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap PCR进行分步连接,得到CV-A16 WH16的全基因组cDNA克隆。对cDNA克隆进行测序,并利用BioEdit 4.8.8、EditSeq 5.01和MEGA 6.06软件进行序列分析和进化树构建。结果CV-A16 WH16基因组(未包含多聚腺苷酸尾)长度为7 406nt;WH16与CV-A16TS10/07、CV-A16原型株G-10以及EV71原型株BrCr的核苷酸一致性分别为97.7%、79.1%和79.5%,而氨基酸一致性分别为98.9%、94.7%和88.7%。全基因组进化树分析表明,CV-A16 WH16与CV-A16TS10/07亲缘关系最近,与G-10株存在显著差异;开放阅读框核苷酸序列进化树分析表明,CV-A16 WH16与EV71BrCr的亲缘关系较近。结论进化树分析表明,与G-10相比,CV-A16 WH16部分区域的核苷酸序列和BrCr的亲缘关系更近。
刘希佳何小华刘万红
关键词：柯萨奇病毒A16进化树
四种FDA批准药物抑制发热伴血小板减少综合征病毒的作用研究
2022年
目的:对从FDA(food and drug administration)批准的1430个化合物中通过微复制子系统筛选出对发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)起抑制作用的药物,并解析药物抗病毒的作用阶段。方法:利用SFTSV微复制子初步筛选出对SFTSV复制转录系统具有抑制作用的药物,通过药物浓度梯度抑制实验确定各药物的半数抑制浓度(IC50)。再利用SFTSV感染细胞模型,使用药物分别与病毒孵育后再感染细胞、与病毒共同和细胞孵育、在病毒与细胞孵育后作用于细胞、以及在病毒感染细胞全过程(entire stage)使用药物,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对感染细胞上清中病毒进行定量,分析药物对病毒感染细胞的整个过程的不同阶段,包括:病毒颗粒稳定性(virion stability)、病毒感染入侵(entry stage)、病毒进入细胞后的复制过程(post-entry)的抑制作用,并与药物作用于病毒感染细胞整个过程的抑制作用相比较,初步揭示药物抑制SFTSV感染的作用机制。结果:吗替麦考酚酯、麦考酚酸、硝唑尼特、Vidofludimus 4种药物对SFTSV具有较好的抑制效果,4种药物对微复制子系统的半数抑制浓度IC50分别为0.014、0.627、1.283、0.059μmol/L;4种药物对SFTSV的抑制作用发生在病毒入侵细胞后的阶段。结论:吗替麦考酚酯、麦考酚酸、硝唑尼特、Vidofludimus具有较好的抗发热伴血小板减少综合征病毒效果。
王田田尹志芸邓雅丽朱琼周敏胡思靖吴巧丽靳佳音张丹娜刘希佳蒋柏勇沈姝邓菲史君明
关键词：药物筛选抗病毒作用
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