孙贵军
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：兰州大学口腔医学院更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导过表达端粒酶逆转录酶的人口腔黏膜上皮稳定细胞系的构建被引量：2
- 2016年
- 目的通过慢病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶逆转录酶(h TERT)基因的口腔黏膜上皮细胞(OMECs),探索构建高效、稳定的永生化OMECs细胞系的方法。方法提取293T细胞总RNA,应用聚合酶链反应(PCR)法扩增h TERT基因全长,构建重组慢病毒载体p LVX-puro-h TERT。包装慢病毒颗粒后感染人正常OMECs,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测h TERT基因m RNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了p LVX-puro-h TERT过表达慢病毒载体并感染到OMECs中;感染细胞与正常OMECs形态相似,呈铺路石样生长;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,h TERT在感染细胞中高表达,与正常细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过慢病毒法成功建立了过表达h TERT的OMECs稳定细胞系,为构建高效、稳定增殖的人永生化OMECs细胞系奠定了实验基础。
- 曾飒秦晓东何祥一车春晓张潇解斯羽孙贵军王立鹤
- 关键词：口腔黏膜上皮细胞人端粒酶逆转录酶
- 口腔鳞癌细胞外泌体分离鉴定及基因表达谱研究被引量：3
- 2018年
- 目的口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，易复发和转移，预后较差。寻找特异性的生物标志，进行无创性的早期筛查或诊断工具的开发，对改善OSCC患者预后差、生存率低、复发率高的现状至关重要。本研究旨在对OSCC细胞（Cal27）及口腔上皮细胞 （human oral epithelial cells, HOEC）来源的外泌体进行分离鉴定及基因表达谱分析，为寻找与OSCC相关的特异性外泌体提供研究基础。方法采用超速离心法从细胞培养上清中分离外泌体，透射电镜观察其形态特征，粒度仪分析其粒径，蛋白质印记法及流式细胞术检测其标志蛋白（ALIX、CD63、CD81）。利用高通量测序技术全面掌握两种外泌体基因表达谱，筛选差异表达基因，并进行生物通路分析。结果Cal27及HOEC外泌体均呈圆形或椭圆形，直径均分布在30～150Dill，ALIX、CD63、CD81标志蛋白呈现阳性表达。基因表达谱分析结果显示，两种外泌体间发生差异有统计学意义，｜log2Fold Changel〉｜，q〈0．001。表达变化的基因共有336个，KEGG生物通路富集分析发现共30个通路符合阈值要求（P〈0．05），其中32个基因（如ACVR1C、CDH20、THBS1等）及8个生物通路（如Wnt信号通路、P13K—Akt信号通路、TGF-8信号通路等）与癌症的发生发展密切相关。结论OSCC细胞及HOEC均能产生丰富的外泌体。0SCC细胞外泌体基因表达谱与HOEC外泌体基因表达谱相比存在很大的差别，通过对二者基因表达谱的分析，筛选出了可能与口腔鳞癌发生发展相关的差异表达基因及生物通路，为寻找与口腔鳞癌相关的特异性外泌体奠定了基础。
- 王世琴金佳佳胡慧珍孙贵军李志勇何祥一
- 关键词：口腔鳞癌外泌体基因表达谱
- 不同采样方法对口腔变形链球菌检出率的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:比较浓缩含漱法、非刺激性唾液法和棉拭子法对高龋和健康人群口腔唾液中变形链球菌检出率的影响。方法:对60例高龋患者和60例无龋者分别用棉拭子法、非刺激性唾液法和浓缩含漱法进行取样,采用轻唾选择培养基对变形链球菌进行培养,结合显微镜观察对3种方法收集到的变形链球菌进行鉴定,并用SPSS 22.0对数据进行统计学分析。结果:3种采样方法在高龋者中检出率分别为93.33%、96.67%、91.67%,无龋者中检出率分别为56.57%、58.33%、48.33%,无统计学显著性差异。结论:3种方法口腔唾液取样一致性较好。其中,棉拭子法采集到的唾液具有良好的代表性。
- 尹峥嵘孙贵军胡慧珍武涛何祥一
- 关键词：采样方法变形链球菌检出率
