陈烨
- 作品数：5 被引量：9H指数：1
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血清对大鼠星形胶质细胞形态和水通道蛋白-4表达的影响
- 2018年
- 目的通过比较培养大鼠星形胶质细胞在有血清培养基和无血清培养基中的形态及水通道蛋白-4(AQP-4)表达水平,探讨血脑屏障破坏对AQP-4表达的影响。方法取雌性Wistar大鼠大脑皮层细胞,分别在无血清培养基、DMEM培养基加10%胎牛血清(FBS)及无血清培养基加10%FBS中培养。倒置相差显微镜观察星形胶质细胞形态和大小,细胞免疫荧光染色及逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、AQP-4及代谢型谷氨酸受体5(m Glu R5)的表达水平。结果在无血清培养基中,星形胶质细胞的细胞核和胞体小且突起细长,折光性强;而在两种添加10%FBS培养基中,星形胶质细胞呈多角扁平形且突起短小,折光性弱。细胞免疫荧光及RT-q PCR结果分析显示,两种加10%FBS培养基中星形胶质细胞GFAP和AQP-4的蛋白和m RNA表达水平均低于无血清培养基(P<0.001),而m Glu R5蛋白和m RNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论血清改变培养星形胶质细胞的形态,降低GFAP和AQP-4的表达。
- 贾梅师忠芳王玉娇闫旭徐立新董丽萍李佳欣陈烨袁芳
- 关键词：血清水通道蛋白-4胶质纤维酸性蛋白代谢型谷氨酸受体5
- 大鼠海人酸点燃海马与杏仁核颞叶癫痫模型发作特点及海马病理学改变的研究被引量：7
- 2019年
- 目的对比观察大鼠海人酸点燃海马与杏仁核癫痫模型不同发作期的行为学、皮质脑电及海马病理学变化。方法雄性成年Sprague-Dawley大鼠24只,按随机数字表法分为海马组、杏仁核组(模型组各9只,对照组各3只)。将海人酸0.6 μl(0.6 μg,1.0 μg/μl)定向注射到大鼠海马CA3区或杏仁核区建立两种癫痫模型。模型建立成功的大鼠按随机数字表法分为癫痫发作后1 d(急性期)、7 d(潜伏期)、30 d(慢性期)组,每组各3只。对照组于海马CA3区或杏仁核区注入等体积的生理盐水。观察不同发作时期大鼠的行为学和皮质脑电变化。采用免疫组织化学染色方法观察海马中神经元的标志物神经元核蛋白(NeuN)、星形胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞的标志物离子钙结合衔接分子1(IIba1)表达的变化。结果两种癫痫模型急性期及慢性期均有典型癫痫发作的行为学及脑电表现。海马模型组注入海人酸后(63.33±4.41)min出现部分性发作,间断伴有癫痫大发作;皮质脑电表现以多相棘波多见。杏仁核模型组注入海人酸后(28.67±3.48) min主要出现癫痫大发作;皮质脑电以尖波发作性节律多见。免疫组织化学染色显示,与对照组比较,从急性期到慢性期,两种模型在海马CA1、CA3和CA4区均为神经元丢失和星形胶质细胞增生逐渐加重,同时伴小胶质细胞在神经元丢失部位逐渐增多、聚集。但与海马模型组比较,杏仁核模型组慢性期在CA1和CA4区神经元丢失[CA1区NeuN的吸光度(A)值为10.83±1.52对比22.43±5.16,P<0.01;CA4区为12.87±2.13对比25.81±4.60,P<0.05]及星形胶质细胞增生(CA1区GFAP A值为61.20±7.33对比14.65±0.12,CA4区为76.73±5.40对比43.01±1.35,均P<0.01)更明显,CA1区小胶质细胞广泛聚集现象更严重(IIba1A值为13.70±3.88对比1.08±0.01,P<0.01)。结论大鼠海人酸点燃海马及杏仁核癫痫模型均能模拟人颞叶癫痫特征,但在行�
- 王玉娇陈烨师忠芳闫旭徐立新董丽萍孙振荣袁芳
- 关键词：海马杏仁核海人酸
- 血小板蛋白质组学在心血管疾病中的应用及进展被引量：1
- 2016年
- 血小板为循环血液中的无核细胞碎片,不同于其他有核细胞,其活化、黏附、聚集及炎症因子释放等功能的实现与其蛋白表达变化或翻译后修饰的动态差异密切相关,而非基因调控。因此对血小板的研究无法采用传统的细胞和分子生物学技术,蛋白质组学技术为研究血小板蛋白质生物学特性提供了理想的手段。
- 王春键王芳陈烨
- 关键词：血小板蛋白质组学冠心病
- 大鼠星形胶质细胞无血清培养方法的研究被引量：1
- 2018年
- 目的 探索应用无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代培养及传代培养的方法.方法 取出生24 h内Wistar大鼠大脑皮质组织,机械吹打分散为单细胞后在无血清培养基中进行原代培养.细胞传代时分别使用乙二胺四乙酸（EDTA）-胰酶或胰酶作为消化液,浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）终止消化作用,按照1∶2或1∶3的比例传代.显微镜下观察细胞生长状态,胶质纤维酸性蛋白（GFAP）细胞免疫荧光染色方法鉴定细胞表型,MTF法检测传代细胞增殖情况.结果 细胞悬液静置15 min后更换新的无血清培养基培养,7d后显微镜下可见细胞生长良好,折光性强,胞体小而突起长;细胞免疫荧光染色鉴定显示＞95％的细胞为GFAP阳性细胞.与应用SBTI终止胰酶反应时未进行离心比较,低温、低速离心（4℃、3 000 ×g）3 min后,传代细胞可在无血清培养基中生长正常并增殖.MTT检测结果显示,EDTA-胰酶消化效果优于胰酶（A值分别为0.290±0.007、0.270±0.006,P＜0.010）;使用浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI终止消化（A值分别为0.290 ±0.013、0.290±0.017,P=0.820）及以1∶2或1∶3比例传代（A值分别为0.340±0.070、0.320 ±0.030,P =0.770）,传代星形胶质细胞数量的差异均无统计学意义.结论 本研究建立无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代及传代培养的方法,为避免血清干扰更好地开展体外星形胶质细胞功能的研究提供了新的细胞模型.
- 徐立新贾梅师忠芳董丽萍闫旭王玉娇陈烨袁芳
- 关键词：星形细胞培养基无血清原代细胞培养
- 泛素特异性蛋白酶25在颞叶癫痫大鼠颞叶皮质中表达变化的实验研究
- 2020年
- 目的探讨海人酸点燃杏仁核大鼠颞叶癫痫模型颞叶皮质中泛素特异性蛋白酶25(USP25)的表达情况。方法将52只SD雄性大鼠按随机数字表法分为癫痫模型组(共39只)和假手术对照组(简称对照组,13只)。癫痫模型组建立海人酸点燃杏仁核大鼠颞叶癫痫模型,再按构建成功的时间分为3组(构建成功1 d为急性期组、构建成功7 d为潜伏期组、构建成功30 d为慢性期组,每组各13只),在观察结束时取材。对照组在杏仁核注入生理盐水,与癫痫模型组伴随取材。免疫组织化学染色及免疫荧光双标法检测USP25在颞叶皮质中的表达及与神经元(NeuN)和星形胶质细胞(GFAP)的共定位情况;实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测USP25在颞叶皮质中的表达变化。结果在注药侧颞叶皮质中,癫痫模型组USP25与NeuN的共定位阳性细胞在癫痫后期增加,USP25 mRNA及蛋白水平在癫痫发作不同时期的表达差异均有统计学意义(F值分别为25.48、7.68,均P<0.05)。与对照组(mRNA:1.00±0.36;蛋白:1.00±0.46)比较,潜伏期组(mRNA:10.80±4.82;蛋白:1.88±0.32)和慢性期组(mRNA:12.97±4.48;蛋白:1.92±0.26)的表达水平显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在未注药侧皮质中,USP25 mRNA及蛋白水平在癫痫发作不同时期的表达差异也均有统计学意义(F值分别为86.86、6.65,均P<0.05)。结论颞叶皮质中USP25的表达在癫痫大鼠潜伏期后增加,提示去泛素化通路参与颞叶癫痫的慢性病理过程。
- 陈烨王玉娇师忠芳闫旭徐立新董丽萍孙振荣袁芳
