- 雷帕霉素对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制的初步研究被引量：4
- 2017年
- 目的研究雷帕霉素(RAPA)对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制。方法体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),使用转化生长因子β1(TGF-β1)处理HK-2细胞,以建立肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转化(EMT)的细胞模型,并联合RAPA处理HK-2细胞,通过Transwell迁移实验和侵袭实验观察HK-2细胞的迁移和侵袭等细胞生物学行为变化;通过RT-PCR、Western blot法观察EMT分子标志物表达的变化;结合前期建立的糖尿病肾病小鼠模型的肾组织及通过腹腔注射RAPA[1mg/(kg·d)]处理后的模型小鼠肾组织,利用HE染色分析肾组织的病理变化;利用免疫组化检测EMT分子标志物的表达变化。结果 Transwell实验结果表明,TGF-β1诱导HK-2细胞发生迁移和侵袭能力明显增加;联合应用RAPA后,迁移和侵袭能力明显抑制。RT-PCR、Western blot和免疫组化结果显示TGF-β1可以促进间质细胞标志分子Vimentin的表达,而上皮标志分子E-cadherin的表达明显降低;联合应用RAPA后可以抑制TGF-β1诱发的EMT作用。HE染色显示,RAPA治疗后,能显著改善糖尿病肾病小鼠肾小管形态病变。结论 RAPA具有抑制肾小管上皮细胞发生EMT作用。
- 成芳涂珍珍周利利苏超王德光周海胜
- 关键词：雷帕霉素糖尿病肾病
- GRHL3调控SNX16表达及其对上皮来源肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
- 背景和目的： Grainyhead-like3(GRHL3)是Grainyhead-like(Grhl)家族的成员之一，Grhl基因家族有三个成员，与果蝇的grainyhead基因家族同源。Grhl基因家族在个体发育和...
- 周利利
- 关键词：鳞状细胞癌细胞迁移
- 转录因子GRHL3抑制SNX16表达促进乳腺癌细胞迁移和侵袭被引量：3
- 2019年
- 目的研究转录因子GRHL3参与调控分拣连接蛋白16(SNX16)表达的分子机制及其对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法免疫组织化学检测乳腺癌组织和癌旁组织中GRHL3和SNX16的表达变化;通过建立过量表达GRHL3的乳腺癌细胞MCF7,Western blot检测GRHL3、SNX16在MCF7细胞中表达变化;利用分子克隆技术构建含有SNX16基因启动子和突变的SNX16基因启动子的荧光素酶报告基因表达载体,通过检测荧光素酶活性变化观察GRHL3对SNX16基因启动子的调控作用;利用Transwell迁移和侵袭实验检测GRHL3过量表达的MCF7细胞迁移和侵袭能力的影响,并通过转染SNX16 cDNA的表达载体回补SNX16表达,观察MCF7细胞的迁移和侵袭能力变化。结果免疫组织化学结果显示:与癌旁组织相比,乳腺癌组织中GRHL3高水平表达,而SNX16的表达水平较低;Western blot结果显示,过量表达GRHL3的MCF7,SNX16的表达水平显著降低(P<0.05);通过分子克隆技术成功构建SNX16基因启动子和突变的SNX16基因启动子的荧光素酶报告基因表达载体;荧光素酶活性检测实验结果显示GRHL3对荧光素酶报告基因SNX16启动子具有显著抑制作用,突变后GRHL3结合位点,GRHL3对SNX16基因启动子的负调控作用消失;Transwell迁移和侵袭实验结果说明过表达GRHL3的MCF7细胞侵袭和迁移能力显著增强,回补SNX16后,MCF7细胞侵袭和迁移能力明显减弱。结论在乳腺癌细胞中,转录因子GRHL3对SNX16的启动子具有负调控作用,GRHL3通过结合SNX16基因启动子抑制SNX16表达,促进细胞的迁移和侵袭。
- 周利利曾凡军涂珍珍涂珍珍郭思佳郭思佳周海胜
- 关键词：乳腺癌迁移
- 转录因子GRHL3促进皮肤鳞癌细胞迁移和侵袭被引量：3
- 2019年
- 目的研究转录因子果蝇头状因子3(GRHL3)对皮肤鳞癌(SCC)细胞系A431细胞迁移和侵袭的影响。方法利用免疫组织化学检测皮肤癌组织GRHL3表达,分析皮肤鳞状细胞癌中GRHL3表达水平与临床病理分期的关系;利用脂质体介导GRHL3过表达载体转染A431细胞,建立过量表达GRHL3的A431细胞系;通过Transwell检测GRHL3对A431细胞迁移和侵袭能力的影响;利用表达谱芯片技术分析过量表达GRHL3对A431细胞迁移、侵袭等相关基因表达变化;采用染色质免疫共沉淀-测序(ChI P-seq)的方法分析GRHL3调控的靶基因及GRHL3的结合位点;比较基因表达谱芯片和染色质免疫共沉淀-测序的结果,以确定GRHL3参与调控细胞迁移和侵袭相关的靶基因。结果免疫组化结果显示SCC组织及癌旁组织GRHL3表达水平较正常皮肤组织明显增加,且与临床病理分期有关;Western blot结果证实GRHL3在A431细胞过量表达,由此成功建立稳定过量表达GRHL3的A431细胞株;Transwell侵袭和迁移试验显示GRHL3过量表达增强了A431细胞迁移和侵袭能力;表达谱芯片结果显示有128个基因与细胞运动和黏附相关;ChI Pseq结果显示GRHL3结合基因组DNA的主要位置是在基因间区(55. 65%),而只有2. 49%分布于结构基因的启动子区域;表达谱芯片显示差异表达的128个基因和ChI P-seq显示的GRHL3调控149个候选基因,均与细胞迁移和侵袭有关,其中有26个基因具有一致性。提示GRHL3通过调控26个候选基因促进皮肤鳞癌细胞的迁移和侵袭。结论 GRHL3通过调控皮肤鳞癌细胞的与迁移和侵袭相关基因表达,促进细胞迁移和侵袭,有助于后续研究GRHL3调控肿瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。
- 邓庆梅周利利郭思佳陈津津郭立钰曾凡军周海胜
- 关键词：皮肤鳞癌A431迁移
