康庄丽
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 抗冻蛋白AFPⅢ的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2009年
- 采用基因重组技术将AFPⅢ基因与原核表达载体pET32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过PCR、单双酶切及测序鉴定构建结果。用IPTG诱导蛋白表达,将融合蛋白纯化后,免疫6-7周龄的小白鼠,制备AFPⅢ多克隆抗体,采用Western印迹法检验抗体特异性。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定多克隆抗体滴度。成功地构建了AFPⅢ的原核表达载体,经在大肠杆菌中诱导表达、镍柱亲和层析纯化,得到较纯的相对分子质量约26 000 Da的融合蛋白,免疫小白鼠后得到多抗血清,Western印迹结果显示此多克隆抗体与AFPⅢ蛋白特异性结合。该试验为进一步研究AFPⅢ在转基因鱼中的定点表达以及作用机制奠定了基础。
- 郝凤霞胡文革付伟超康庄丽张桂玲
- 关键词：抗冻蛋白原核表达重组融合蛋白纯化抗体
