张彦兵
- 作品数：36 被引量：43H指数：4
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高层次人才科研启动基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 一株牛源多动物链球菌致病性及基因组特性分析
- 2024年
- 【背景】多动物链球菌(Streptococcus pluranimalium,Sp)最早于1999年由Devriese等报道,是一种具有广泛宿主来源的潜在人畜共患病原体。目前的研究中,该菌种已从牛、羊、猪、肉鸡等多个物种的感染组织中被分离确认。然而,目前对其致病性、耐药性和基因组学等相关研究较少。【目的】从牛呼吸道分离鉴定一株Sp菌,分析其致病性及耐药性;通过基因组测序分析,明确其基因组的基本特征及部分毒力因子和耐药基因。【方法】从患病牛鼻拭子分离菌株并进行16S rRNA基因测序鉴定,开展对兔致病性试验和药敏试验;通过Illumina测序、组装以获取该菌株基因组一般特征信息,进行Swiss-Prot、NR、GO、COG、KEGG、CAZy、TCDB、Pfam数据库注释并分析基因功能,并通过PHI、VFDB、CARD数据库注释该菌株的毒力因子及耐药基因。【结果】分离到一株多动物链球菌Bov5,可引起兔肺组织肺间隔增厚及炎性细胞浸润;药敏试验结果显示其对林可霉素和克林霉素耐药,对链霉素中介;全基因组测序组装后确定其基因组大小为2038579bp(2.04Mb),注释到的编码基因共计1981个,注释到毒力因子100个,突变导致病原致病能力增强的基因28个,耐药相关基因83个。【结论】分离到一株具有较强致病性的牛源多动物链球菌,构建了菌株基因组框架图,挖掘出系列毒力和耐药相关基因,为进一步研究Sp致病基因和耐药基因奠定了基础。
- 范文雨顾兰英高之煜曹鑫艳张彦兵孙延鸣
- 关键词：链球菌全基因组测序耐药性
- 兽医外科手术学综合实验课程改革与研究
- 2023年
- 兽医外科手术学综合实验是动物医学专业必修课,也是一门实践性和应用性较强的专业课程。过程性考核具有考核内容全面、考核方式灵活、学习效果反馈及时等特点,已经逐步得到越来越多的认可和采用。在兽医外科手术学综合实验教学过程中采用过程性考核,对学生的综合能力的评价更全面、更科学,可以使学生对知识的掌握更全面和扎实,学习效果更佳。
- 张彦兵叶翠芳蒋松王建梅盛金良刘良波孙延鸣
- 关键词：过程性考核课程改革无菌术
- 重组绵羊肺表面活性物质结合蛋白A的体外生物学活性检测
- 2021年
- 旨在研究重组绵羊肺表面活性物质结合蛋白A(rSP-A)对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性及淋巴细胞体外增殖的影响,初步分析rSP-A的抑菌活性。使用绵羊肺炎支原体(Mo)感染体外培养的绵羊外周血中性粒细胞以刺激其释放NE,然后应用底物显色法对比分析不同浓度rSP-A对NE活性的影响;使用MTT比色法测定rSP-A对体外培养的绵羊外周血淋巴细胞增殖活性的影响;使用酸化法和平板菌落计数法测定rSP-A对Mo代谢与增殖的影响;应用平板菌落计数法对rSP-A的抑菌活性进行初步分析。NE活性检测结果表明,rSP-A可显著增强Mo刺激绵羊外周血中性粒细胞释放的NE活性(P<0.05),且呈剂量效应关系;淋巴细胞增殖试验显示,rSP-A能够显著抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05);代谢试验证实rSP-A对体外培养的Mo的代谢具有明显的抑制作用(P<0.01);抑菌试验显示,rSP-A对致病性肺炎链球菌和巴氏杆菌的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05)。研究结果说明,真核表达的rSP-A具有明显的生物学活性,这为进一步研究绵羊体内肺表面活性物质结合蛋白A(SP-A)的生物学特性奠定了基础。
- 李增强赵宁张彦兵李珂儿魏立翔孙延鸣
- 关键词：绵羊中性粒细胞弹性蛋白酶生物学活性绵羊肺炎支原体
- 羊的瘤胃切开术虚拟仿真实验教学设计及应用
- 为适应高素质创新型兽医人才培养需求,主动适应信息时代新农科实践教学、理论教学、新兴技术的紧密融合。笔者采用虚拟仿真技术设计了羊的瘤胃切开术虚拟仿真实验教学系统,通过人机互动模拟瘤胃切开术全过程,在临床实践前,通过虚拟仿真...
- 刘良波张彦兵叶翠芳王建梅孙延鸣
- 关键词：瘤胃切开术实验教学设计教学改革
- 绵羊清道夫受体A启动子活性分析
- 2025年
- 旨在初步分析绵羊清道夫受体A(SRA)启动子活性调节机理,为进一步探究SRA转录调控机制奠定基础。使用同源重组的方法构建SRA启动子报告质粒,XhoⅠ酶切验证,进一步测序比对;将构建的SRA启动子报告质粒与海肾荧光素酶载体共转染至HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因试验检测SRA启动子活性。利用化学合成技术合成肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)真核表达载体,将SRA报告基因载体分别与干扰素调节因子1(IRF1)、TNF-α和IL-6的表达载体共转染于HEK293T细胞,分析IRF1、TNF-α和IL-6对SRA启动子活性的影响。结果显示,XhoⅠ酶切pGL3-SRA出现预期目的条带和载体片段,测序比对正确,成功构建pGL3-SRA启动子报告基因载体;双荧光素酶报告基因试验证实SRA启动子具有较强的活性,IRF1、TNF-α和IL-6过表达能显著激活SRA的启动子活性(P<0.05,P<0.01)。研究结果为进一步探究IRF1、TNF-α和IL-6对SRA表达调控机制提供了基础资料。
- 曹鑫艳王钢张秦川范文雨顾兰英盛金良贺笋孙延鸣张彦兵
- 关键词：绵羊清道夫受体A转录调控启动子活性
- oar-miR-103和oar-miR-107通过靶向IL-1β基因区域调节其表达
- 2025年
- 为确定oar-miR-103和oar-miR-107靶向IL-1β基因的区域及结合能力,验证绵羊oar-miR-103和oar-miR-107对绵羊IL-1β表达的调控作用,用miRanda软件分析oar-miR-103、oar-miR-107靶向IL-1β基因的具体区域和结合能力;将IL-1β基因插入PGL3-promoter荧光素酶报告基因载体XbaⅠ酶切位点,分别将miR-NC、miR-103和miR-107模拟物与荧光素酶质粒共转染,通过双荧光素酶报告试验分析oar-miR-103和oar-miR-107与IL-1β基因区域靶向关系;分离原代绵羊肺泡巨噬细胞,miR-NC、miR-103和miR-107模拟物分别转染原代肺泡巨噬细胞,转染36 h后,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中IL-1β表达水平。结果显示,oar-miR-103和oar-miR-107分别靶向IL-1β基因2个、3个区域;成功构建了荧光素酶报告载体pGL3-promoter-IL-1β;双荧光素酶试验显示,与miR-NC组相比,oar-miR-103和oar-miR-107两组均使pGL3-promoter-IL-1β活性显著下降(P<0.01);与miR-NC组相比,oar-miR-107显著抑制了巨噬细胞IL-1βmRNA转录表达(P<0.05)。说明oar-miR-103和oar-miR-107可通过靶向IL-1β基因区域调节其表达,为解析IL-1β表达机理积累了资料。
- 高之煜顾兰英范文雨曹鑫艳陈创夫肖非易继海盛金良张彦兵孙延鸣
- 关键词：白介素1ΒMICRORNASMIRANDA荧光素酶报告基因
- PRRSV N蛋白抗原肽的预测、合成以及针对该抗原肽抗体的制备和应用被引量：2
- 2018年
- 基于生物信息学、化学合成技术和免疫学技术,利用预测的抗原肽进行抗体的制备已被广泛地应用。本研究探讨了利用预测的抗原肽制备针对PRRSV N蛋白的特异性抗体。首先,利用生物学软件对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白进行抗原性预测,获得一个位于蛋白N端16个氨基酸的候选抗原肽。通过BLAST比对,发现该抗原肽在不同北美型毒株中高度保守。其次,采用Fmoc固相法进行抗原肽合成,并将合成的抗原肽通过MBS法偶联到KLH载体蛋白上。随后,将偶联好的抗原肽与弗氏完全佐剂或不完全佐剂混合,免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并利用IgG亲和层析的方法纯化抗体。最后,利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对抗体的特异性进行检测,结果显示,利用偶联好的抗原肽包被ELISA板,检测抗体的滴度,纯化抗体的滴度超过10~5;Western blot结果显示,该抗体(1∶2000)可以特异地识别PRRSV感染的Marc145细胞中的N蛋白,重要的是该抗体可以与不同毒株反应;IFA检测显示,该纯化的抗体(1∶100)可以检测PRRSV感染的细胞。因此,利用生物信息学软件预测的PRRSV N蛋白的抗原肽,能有效地应用于抗PRRSV N蛋白抗体的制备,制备的抗体不仅为研究PRRSV N蛋白奠定基础,而且为研究PRRSV与细胞相互作用提供了一个有效的工具。
- 相笑张彦兵石元元李玉明刘珂魏建超邵东华李蓓蓓童光志马志永邱亚峰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白抗原肽抗体
- 绵羊microRNAs靶向TNF 3'UTR基因区域分析
- 2022年
- 为了探讨绵羊microRNAs(miRNAs)是否靶向TNF 3’UTR区域,以及初步确定miRNAs靶向其基因的区域,笔者以绵羊miRNAs为研究对象,利用PCR方法克隆TNF 3’UTR(3’非翻译区),应用miRanda软件分析miRNAs靶向TNF 3’UTR基因的具体区域和结合能力。结果表明,成功克隆TNF 3’UTR,大小为500 bp;miR-125b、let-7b和let-7c同时靶向TNF 3’UTR基因,表明宿主miRNAs具有潜在的靶向抑制TNF 3’UTR基因表达的能力,初步明确miRNAs靶向TNF 3’UTR基因的具体区域,为进一步探讨miRNAs调节TNF 3’UTR表达提供了基础资料。
- 曹鑫艳魏立翔高之煜刘良波张辉闫卫疆肖非孙雪梅盛金良张彦兵孙延鸣
- 关键词：TNFMICRORNASMIRANDA
- 绵羊干扰素调节因子1基因克隆、序列分析及真核表达
- 2022年
- 绵羊干扰素调节因子1(interferon regulatory factor 1,IRF1)在病原微生物感染中发挥重要作用。为研究绵羊IRF1功能,以绵羊肺组织cDNA为模板,扩增IRF1基因ORF,并对其序列进行生物信息学分析,构建p3×Flag-CMV-14-IRF1重组质粒。将重组质粒转染HEK293T细胞,运用Western blot进行蛋白质鉴定。结果表明,绵羊IRF1 ORF大小为969 bp,编码325个氨基酸;绵羊IRF1氨基酸序列与山羊、猪、人、马相似性分别为100%、91.61%、87.73%和89.44%;进化树显示,绵羊IRF1与山羊、牛、猪、白鳍豚、马等哺乳动物聚类在一起;绵羊IRF1蛋白分子式为C_(1596)H_(2497)N_(435)O_(497)S_(17),理论等电点为5.58,具有1个潜在的N-糖基化位点和多个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构域;该重组蛋白高效表达,分子质量约为50 ku。研究结果为绵羊的IRF1功能研究提供了基础材料。
- 魏立翔解艺璇高之煜曹鑫艳张彦兵孙延鸣
- 关键词：生物信息学分析转录因子真核表达
- PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用
- 2024年
- 本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。
- 解艺璇张彦兵李慧朱琳葛菲菲刘珂魏建超李宗杰邵东华李蓓蓓马志永孙延鸣邱亚峰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒合成肽多克隆抗体非结构蛋白
