目的:探讨天然化合物葫芦素B(Cucurbitacin B,CuB)对多柔比星(Doxorubicin,Dox)耐药的人乳腺癌细胞MCF-7/Dox的耐药逆转作用及机制。方法:台盼蓝计数实验及集落形成率实验检测CuB对细胞生长的抑制作用;MTT法检测CuB对MCF-7/Dox的抑制作用及逆转Dox耐受作用;核染色免疫荧光及免疫印迹法分析CuB诱导细胞凋亡作用及逆转MCF-7/Dox细胞Dox耐药的作用机理。结果:CuB可以显著抑制MCF-7/Dox细胞增殖、生长,诱导凋亡及逆转Dox耐药。机制研究发现,CuB能够抑制与肿瘤多药耐药相关蛋白的表达,包括P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药性相关蛋白(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)和细胞周期蛋白Cyclin D1。CuB可以诱导Caspase依赖性的细胞凋亡和降低Akt的磷酸化。CuB通过诱导蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的活化实现对Akt活性的抑制,而下调蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)可以活化PP2A。结论:CuB能够逆转MCF-7/Dox对Dox的耐药并诱导其凋亡,其机制可能是抑制了CIP2A/PP2A/Akt信号级联。
目的:探讨重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ,PPⅠ)通过靶向信号转导和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖和诱导凋亡的分子机制。方法:用不同浓度的PPⅠ处理U251细胞后,分别采用MTT法、锥虫蓝染色计数法和克隆形成实验检测PPⅠ对胶质瘤U251细胞增殖的影响;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,JC-1法检测线粒体膜电位;运用Swiss Target Prediction在线软件预测与PPⅠ相结合的关键因子;采用蛋白质印迹法检测STAT3信号通路相关蛋白的表达情况;最后进行分子对接模拟PPⅠ与STAT3的结合方式及作用模式。结果:PPⅠ以时间和浓度依赖方式抑制U251细胞增殖(P值均<0.05)。PPⅠ通过线粒体途径诱导U251细胞凋亡(P<0.05)。PPⅠ能够和多种转录因子及蛋白磷酸酶结合,其中与STAT3的结合作用最强(P<0.05)。不同浓度的PPⅠ作用后,U251细胞中磷酸化STAT3蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.05),而STAT3总蛋白的表达量无变化(P值均>0.05)。PPⅠ的氢原子能够与天冬氨酸(aspartic acid,Asp)-334残基上的氧原子形成氢键,进而增强其靶向STAT3的能力。结论:PPⅠ通过靶向STAT3抑制神经胶质瘤U251细胞增殖,并诱导凋亡。
