杨晶
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 一种用于构建红色红曲霉基因组cosmid文库的大片段DNA制备方法被引量：4
- 2009年
- 【目的】制备用于构建红色红曲霉cosmid文库的大片段基因组DNA。【方法】采用优化的酚氯仿抽提法制备DNA,并利用Sau3AI切割至平均大小为40 kb,然后使用Stratagene包装蛋白构建cosmid文库。基于PCR法使用同源探针从该文库中进行了目的基因的筛选。【结果】制备了浓度为5μg/μL,平均片段大小大于48 kb的红色红曲霉大片段基因组DNA。利用该DNA构建的cosmid文库基因组覆盖倍数为10,并筛选到了含有目的片段的cosmid。【结论】通过该方法制备红色红曲霉大片段基因组DNA简便易行并且完全可以用于构建cosmid文库。
- 安洋杨晶徐欣欣刘钢
- 灰黄青霉Pa-pex11基因对青霉素产生的影响被引量：1
- 2009年
- 【目的】研究灰黄青霉Pa-pex11对青霉素产生的影响。【方法】通过保守序列设计引物从灰黄青霉中克隆了含有pex11同源基因DNA片段,进而通过热不对称交错PCR(Thermal asymmetric interlacedPCR,TailPCR)扩增得到灰黄青霉中Pa-pex11基因的全序列。利用根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)系统,在灰黄青霉基因组上导入额外的Pa-pex11基因。对灰黄青霉野生型菌株和转化子进行了青霉素发酵及生物活性测定。通过荧光定量PCR(quantitative PCR)对转化子中的Pa-pex11拷贝数进行了相对定量。同时通过透射电镜观察了菌体中微体数量的变化。【结果】实现了灰黄青霉根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了在灰黄青霉基因组上插入额外Pa-pex11基因的转化子,在转化子中青霉素产量较野生型菌株提高了1.7倍,电镜照片显示转化子中微体数量明显增加。【结论】通过在基因组中增加Pa-pex11拷贝数能有效地增加灰黄青霉微体的数量,进而提高青霉素的产量。
- 杨晶安洋徐欣欣刘钢
- 关键词：青霉素微体
