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祁影
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1
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供职机构:
中山大学中山医学院眼科学国家重点实验室
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
孙雪荣
中山大学中山医学院眼科学国家重...
葛坚
中山大学中山医学院眼科学国家重...
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中山大学中山医学院眼科学国家重...
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原发性开角型青光眼致病基因小鼠MYOC Pro356Leu突变型质粒构建及鉴定
2010年
目的:构建小鼠MYOC Pro356Leu突变型质粒及鉴定。方法:1.将含有红重组酶基因的质粒pKD46电击入RP23-180F15 BAC克隆。2.利用PCR扩增pStart-K载体,将PCR产物电穿孔入RP23-180F15 BAC红色重组细菌的MYOC基因组片段。3.PCR扩增mMyoc AfeⅠ片段,亚克隆mMyoc AfeⅠ片段进入pBluescript载体。4.设计两条寡核苷酸将Pro356Leu(C to T at codon 356)导入pBS_mMyoc AfeⅠ克隆。5.通过酶切及连接酶反应将pBS_mMyoc AfeⅠmut clone导入pStart-K_mMyoc构建成pStart-K_mMyoc mut克隆。结果:成功构建小鼠MYOC Pro356Leu突变型质粒pStart-K_mMyoc mut克隆,并经酶切及测序证实。结论:应用红重组技术及pStart-K载体克隆大片段DNA是有效的DNA克隆方法,我们所构建的MYOC Pro356Leu突变型质粒将为研究MYOC基因在原发性开角型青光眼发病中的功能和作用提供实验依据。
李春梅
卓业鸿
陈梦飞
孙雪荣
祁影
葛坚
关键词:
原发性开角型青光眼
质粒构建
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