郑志
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：昆明理工大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达Syncytin基因的真核表达载体及EL4-syncytin细胞系的建立及鉴定
- 人内源性逆转录病毒(human endogenous retroviruses,HERV)是几百万年前整合到人类基因组中,并以孟德尔方式遗传至今的逆转录病毒的残余物,约占人类基因组DNA的8%。大多数HERVs在进化过程...
- 郑志
- 关键词：白血病真核表达载体荧光定量PCRSYNCYTIN
- Syncytin慢病毒干扰载体及syncytin沉默Jurkat细胞系的建立
- 2014年
- 目的构建PGC-LV-syncytin慢病毒载体并建立Syncytin基因表达下调的Jurkat细胞系.方法利用RNA干扰序列软件设计并筛选有效干扰序列,将构建好的Syncytin表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒后感染Jurkat细胞,获得Syncytin稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,分别使用RealtimePCR和Annexin V-APC单染法结合流式细胞仪检测目的基因表达水平和细胞凋亡率.结果成功构建了具有Syncytin干扰效果的慢病毒载体及其稳定沉默的Jurkat细胞系.结论该细胞系的构建为进一步研究Syncytin基因在白血病的功能提供了细胞模型.
- 郑志牛华陶瑞张桂前范欣高玉红孙鹥
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 稳定表达Syncytin的EL4细胞系的建立及鉴定被引量：1
- 2014年
- Syncytin是人类内源性逆转录病毒W家族的囊膜蛋白。近期研究发现Syncytin与白血病密切相关。为研究Syncytin的生物学功能,我们克隆了人syncytin,并连接到pIRES2-EGFP质粒上,转化该质粒至感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆进行PCR、酶切电泳和DNA测序鉴定,成功构建了表达syncytin基因的真核表达载体。利用罗氏转染试剂转染重组质粒至EL4细胞,并通过G418选择性培养基筛选,在荧光显微镜下观察细胞中Syncytin表达,用RT-PCR、Western blot检测Syncytin表达水平,结果显示我们成功构建了稳定表达人Syncytin的EL4细胞系。稳定表达人Syncytin的EL4细胞系的建立,为进一步研究人Syncytin功能及其与白血病免疫逃逸的关系提供了重要的细胞模型和实验基础。
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- 关键词：真核表达载体白血病
