韩妮
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生文化科学更多>>
- Ⅰ型马立克病毒UL24蛋白的原核表达及其亚细胞定位的研究被引量：1
- 2018年
- 为研究Ⅰ型马立克病毒（MDV）UL24蛋白的亚细胞定位,以MDV GX0101为模板,PCR扩增UL24基因全长,分别克隆到原核表达载体pGEX-6P-1、pET-32a（＋）和真核表达载体pEGFP-C1中。将原核表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中表达,并进行纯化和鉴定。用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,制备并鉴定抗UL24蛋白的多克隆抗体。通过间接免疫荧光试验（IFA）检测感染GX0101的鸡胚成纤维细胞（CEF）中的UL24蛋白。同时,将真核表达重组质粒pEGFP-C1-UL24转染CEF细胞,通过激光共聚焦显微镜观察UL24蛋白在CEF中的亚细胞定位。结果显示Ⅰ型MDV的UL24基因在原核表达载体中能够正确表达,免疫小鼠后获得抗UL24蛋白的多克隆抗体。该抗体可特异性识别MDV UL24蛋白,且MDV UL24蛋白在CEF的细胞质和细胞核中定位,以上研究结果为进一步研究MDV UL24基因的功能奠定基础。
- 张言坤吴佳燕韩妮周忠文苏帅苏帅
- 关键词：多克隆抗体亚细胞定位
- 新时期高校加强网络思想政治教育的探索与实践被引量：2
- 2015年
- 互联网时代的到来,将网络推到了信息获取的首要位置,传统的思政教育模式远离时代节奏,网络思想政治教育的实践成为信息时代的创新。目前网络思政教育尚存在内容简单重复、方法缺深入研究、教育者队伍缺少、定位不明确等诸多问题,结合网络思政教育虚拟性、全面性、共享性、自主选择性的特点,对网络媒体、网络教育、网络文化、网络队伍等方面进行了相关探索,实现在教育信息化时代背景下,高校加强网络思想政治教育的探索和实践。
- 殷子惠彭云龙韩妮祝萍
- 关键词：网络思想政治教育
- 不同代次缺失meq基因的重组马立克病毒SC9-1株主要基因序列同源性分析被引量：2
- 2017年
- 分析缺失meq基因的重组马立克病病毒SC9-1原代、10代及40代主要基因序列的同源性。提取缺失meq基因的重组马立克病病毒SC9-1原代、10代及40代DNA,设计引物PCR扩增其与致瘤相关pp38基因、缺失meq基因后残余的FRT位点序列及囊膜蛋白基因gB、gC、gD、gE、gH、gI、gK,连接pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆进行测序,DNAStar软件对3代次各基因片段进行同源性比对。不同代次SC9-1病毒株的致瘤相关pp38基因、残留FRT位点序列及囊膜蛋白基因gB、gC、gD、gE、gH、gI、gK的核苷酸序列同源性均为100%,核苷酸序列差异性分析结果显示序列完全一致,无位点上的变化。缺失meq基因的重组马立克病病毒SC9-1在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的传代过程中其致瘤相关pp38基因、残留FRT位点序列及囊膜蛋白基因gB、gC、gD、gE、gH、gI、gK没有发生变异,侧面反映了SC9-1在CEF细胞传代过程中具有很好的遗传稳定性。
- 陈俊霞韩妮张言坤孙鹏周忠文苏帅崔治中
- 关键词：马立克病毒基因序列同源性分析
- 马立克氏病毒meq基因缺失株SC9-1通过自然重组获得meq能力的分析被引量：1
- 2017年
- 为了探究meq基因缺失的马立克氏病毒疫苗株SC9-1与超强毒株Md5是否能够通过自然重组获得meq基因的能力,将SC9-1疫苗毒和Md5超强毒共同感染鸡胚成纤维细胞(CEF),并在CEF上连续传三代,提取单个蚀斑的病毒DNA。同时将Md5超强毒接种免疫过SC9-1疫苗株的SPF鸡,在不同的时间点分离病毒,提取单个蚀斑的病毒DNA。将两种方式获得的病毒DNA进行PCR验证,并将香啤酒重组酶位点(FRT)残留序列克隆测序,比较其同源性。两种方式鉴定的病毒均为SC9-1或是Md5,没有检测到重组病毒,而且FRT残留序列同源性为100%。结果 SC9-1没有从野生毒株Md5获得缺失的meq基因,而且meq基因敲除区具有很好的遗传稳定性。
- 张言坤韩妮孙鹏陈俊霞苏帅赵鹏崔治中
- 关键词：MEQ基因PCR鉴定
- 不同类型鸡泄殖腔棉拭子禽白血病病毒p27抗原检测与病毒分离的相关性分析被引量：10
- 2017年
- 为探讨泄殖腔棉拭子或种蛋中禽白血病病毒(ALV)-p27抗原检测与病毒分离检测之间的相关性,对不同类型鸡编号后分别对应采集泄殖腔棉拭子或蛋清后以ALV-p27抗原检测试剂盒检测,同时无菌采集抗凝血接种DF-1细胞进行ALV的分离鉴定。结果显示,人工感染A亚群ALV的SPF鸡群泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测与病毒分离有很高的吻合率,相对于病毒分离法,119次泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测中出现有1例假阳性和3例假阴性;从美国进口的200只祖代肉鸡3次采血DF1细胞分离病毒结果均为阴性,而泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率依次为4.00%(8/200),2.97%(5/168)和2.61%(4/153),假阳性率为3.30%。相对于病毒分离法,正在实施ALV净化的不同遗传背景地方品系鸡泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测的假阳性率高达93.20%~100.00%,还有一定比例假阴性(1/9,1/4,1/3)。本研究大量对应比较的数据表明,相对于血浆病毒分离法,不同类型鸡的泄殖腔棉拭子ALVp27抗原检测法不仅有很高的假阳性率,还有一定比例的漏检率。在种鸡场的ALV净化过程中考虑到成本,不建议以泄殖腔棉拭子作为检测材料。本试验为我国鸡群禽白血病净化检测和临床鉴别诊断提供参考依据。
- 陈俊霞范建华许书珍孙鹏王一新李思菲韩妮张言坤徐步赵鹏崔治中
- 关键词：禽白血病病毒病毒分离P27抗原
- 马立克病毒基因缺失疫苗与商品化疫苗的分子鉴别方法
- 2017年
- 为了对马立克病毒(MDV)meq基因缺失疫苗株SC9-1与商品化MD疫苗CVI988/Rispens株、814株和HVT FC-126株进行分子鉴别,本研究根据疫苗株SC9-1与其它MD疫苗株的基因组差异,分别针对I型MDVmeq基因以及SC9-1基因组中的禽网状内皮组织增殖症病毒-长末端重复序列(REV-LTR)插入片段,设计三对PCR扩增引物,同时合成针对meq基因和REV-LTR片段的地高辛标记探针,通过PCR扩增和斑点杂交方法区分SC9-1株与其他疫苗株。结果表明,使用针对meq基因的引物F1/R1进行PCR扩增,SC9-1株、CVI988/Rispens株、814株分别扩增出184bp、1 297bp、1 297bp目的片段,HVT FC-126株没有条带;使用针对meq基因的引物F2/R2进行PCR扩增,CVI988/Rispens株、814株均扩增出746bp目的片段,SC9-1株、HVT FC-126株均没有条带;使用针对REV-LTR片段设计的引物F3/R3进行PCR扩增,SC9-1株扩增出512bp目的片段,CVI988/Rispens株、814株、HVT FC-126株均没有条带。同时,使用针对meq基因的探针进行斑点杂交,CVI988/Rispens株、814株均显示阳性结果,SC9-1株、HVT FC-126株均为阴性;使用针对REV-LTR的探针进行斑点杂交,SC9-1株显示阳性结果,CVI988/Rispens株、814株、HVT FC-126株均为阴性。因此,利用本研究设计的特异性PCR引物以及探针,通过PCR扩增和斑点杂交方法可有效区分SC9-1与其他商品化MD疫苗。
- 韩妮张言坤陈俊霞苏帅赵鹏崔治中
- 关键词：PCR扩增斑点杂交
- 鸡传染性贫血病毒感染对马立克疫苗免疫效果影响的研究
- 近年来,国内鸡群呈现马立克病(Marek's disease,MD)野毒感染流行趋势,研究发现发病鸡群常伴随其它免疫抑制病毒的感染,其中鸡传染性贫血病毒(Chicken infections anemia,CIAV)共感...
- 张言坤吴佳燕韩妮周忠文苏帅崔治中
- 马立克病毒GX0101 ul24基因缺失株的构建及其鉴定
- 为了揭示马立克病毒(Marek's disease virus,MDV)GX0101 ul24基因作用,分析u124目的蛋白的表达情况和细胞定位,本研究构建缺失GX0101 ul24基因的重组病毒,并且制备高效价鼠抗马立...
- 张言坤吴佳燕韩妮周忠文苏帅崔治中
