黎宇
- 作品数：8 被引量：126H指数：6
- 供职机构：江西中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金江西省卫生厅中医药科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小檗碱对脂肪胰岛素抵抗细胞PPARγ及脂肪分泌因子表达的影响被引量：18
- 2016年
- 脂肪分泌细胞因子与脂肪组织胰岛素抵抗(IR)密切相关,在糖尿病的发生发展研究中越来越受到重视。该实验主要研究小檗碱对脂肪胰岛素抵抗(IR)细胞PPARγ和脂肪分泌因子mRNA表达的影响,探讨小檗碱增强胰岛素敏感性的分子机制及微滴数字PCR(ddPCR)方法的应用优势。该实验采用ddPCR绝对定量分析简单直观确定合适的内参基因,ddPCR和荧光定量法(qPCR)方法比较研究不同剂量(10,20,50,100μmol·L-1)小檗碱干预IR 3T3-L1脂肪细胞中PPARγ、脂联素、抵抗素和瘦素mRNA表达;加入GW9662研究PPARγ和脂联素mRNA表达的内在关联。ddPCR结果发现β-actin在脂肪细胞中表达稳定,适合作为内参基因对定量PCR数据标准化。ddPCR和qPCR方法均显示与IR模型组相比,10,20,50,100μmol·L-1小檗碱呈现剂量依赖降低脂联素mRNA表达(P<0.01)。对于PPARγ,qPCR显示20,50,100μmol·L-1小檗碱呈现剂量依赖降低其表达(P<0.01),而ddPCR仅在50,100μmol·L-1降低其表达(P<0.05)。PPARγ特异拮抗剂GW9662干预实验表明脂联素基因表达受PPARγ直接调控(P<0.05)。ddPCR探针法检测到各剂量小檗碱均剂量依赖显著降低抵抗素和瘦素mRNA表达(P<0.01)。结果揭示小檗碱调节脂联素起到胰岛素增敏作用并非通过PPARγ依赖途径在转录调控水平上调脂联素表达,推测可能是在翻译后调控水平上调高聚体脂联素比例。小檗碱下调抵抗素和瘦素表达减轻脂解改善IR。ddPCR比qPCR具有更好线性范围和灵敏度,对低丰度表达基因检测具有明显的技术优势。
- 涂珺罗新新李冰涛黎宇徐国良
- 关键词：小檗碱胰岛素抵抗PPARΓ脂肪细胞因子
- 中药治疗糖尿病的研究进展被引量：36
- 2015年
- 糖尿病是一种以血糖升高为临床特点的常见代谢性疾病,流行病学调查发现近年来发病呈快速上升趋势。糖尿病由多基因与环境共同诱发,其复杂病因学决定了糖尿病治疗的复杂性。目前主要基于单靶点开发的糖尿病药物治疗存在很大的局限性。中药治疗糖尿病具有独特的作用机制,能多靶点多环节多途径改善多个器官组织功能,从而显著改善临床症状及其并发症,长期使用副作用小,有着西医不可替代的作用和独特优势。药理研究显示治疗糖尿病的主要中药药效成分为黄酮类、生物碱、多糖类和皂甙类。本文就近年来应用中药治疗糖尿病及其并发症的临床及基础研究进展进行整理综述。单味中药以临床应用较多的苦瓜、人参、葛根和黄连为代表。复方中临床应用最广泛的六味地黄丸和经方新用的葛根芩连汤复方将被重点阐述。
- 史秀明徐国良黎宇涂珺
- 关键词：中药中药复方糖尿病六味地黄丸葛根芩连汤
- 葛根上调肝胰岛素抵抗HepG2细胞OB-R,IRS2,GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢的研究被引量：30
- 2017年
- 研究中药葛根对人肝癌Hep G2细胞胰岛素抵抗(IR)模型糖代谢的改善作用并初步探讨葛根降糖的分子作用机制。该实验采用课题组优化方法,1×10^(-9)mol·L^(-1)胰岛素加3.75×10^(-6)mol·L^(-1)地塞米松联合给药Hep G2细胞48 h建立稳定的IR模型;CCK-8法检测葛根含药血清对细胞活性的影响;葡萄糖氧化酶法检测多个时间点(12,15,18,21,24,30,36 h)IRHep G2细胞葡萄糖消耗量;蒽酮法检测细胞内糖原含量;Western blot法检测胰岛素受体底物2(IRS2)、瘦素受体(Ob-R)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和GLUT2蛋白表达水平。研究结果显示葛根含药血清(5%,10%,15%)对IR-Hep G2细胞的活力没有明显的影响;5%和10%葛根含药血清在给药18,21,24 h均显著上调IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量(P<0.01),15%葛根含药血清除给药15 h上调葡萄糖消耗量较弱(P<0.05),18,21,24,30 h都显著上调葡萄糖消耗量(P<0.01),呈现一定程度剂量依赖性。葡萄糖消耗时效实验确认24 h是最佳时间点,进一步研究发现葛根含药血清作用24 h增加胞内糖原含量(P<0.01);上调IRS2,Ob-R,GLUT1和GLUT2蛋白表达量。葛根含药血清降糖作用可能部分通过上调Ob-R和IRS2蛋白表达来调节以PI3K/PDK为中心的胰岛素信号通路;上调IR-HepG2细胞GLUT1和GLUT2表达量,加速葡萄糖转运进入肝细胞中并增加糖原合成来增强IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性来实现的。
- 黎宇罗新新严奉东魏漳彬涂珺
- 关键词：GLUT2
- 胰岛素和地塞米松联合诱导建立肝胰岛素抵抗细胞模型被引量：3
- 2016年
- 目的 :探索胰岛素和地塞米松诱导肝胰岛素抵抗细胞模型,确定肝胰岛素抵抗细胞模型建立的最佳给药浓度和时间。方法 :采用含不同浓度地塞米松单独诱导及与胰岛素联合诱导HepG2细胞。采用CCK-8检测细胞活力,葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)检测细胞上清液的葡萄糖含量,GPO-PAO法和蒽酮法分别检测细胞甘油三酯含量和糖原含量,油红O染色检测细胞形态的变化,结果 :HepG2细胞产生胰岛素抵抗的最佳给药浓度是1×10-9mol/L胰岛素加3.75×10^(-6)mol/L地塞米松,最佳给药时间为48h,此时Hep G2细胞葡萄糖消耗量明显减小(P<0.01),糖原含量明显降低(P<0.01),甘油三酯含量增加(P<0.01),脂粒明显增加。结论 :1×10^(-9)mol/L胰岛素加3.75×10^(-6)mol/L地塞米松联合诱导HepG2细胞48h可建立稳定可靠的肝胰岛素抵抗细胞模型。
- 黎宇徐国良罗新新李冰涛徐彬智涂珺
- 关键词：HEPG2细胞胰岛素抵抗胰岛素地塞米松
- PPARα:湿热型糖尿病的潜在治疗靶标
- 临床调查发现湿热型糖尿病在糖尿病中医临床四种分型中发病率最高。湿热型糖尿病主要由高糖高脂饮食诱发，多伴随胰岛素抵抗;且湿热证糖尿病越严重，其胰岛素抵抗越严重。基于中医方证对应，病症结合的临床实践发现张仲景的经典名方葛根芩...
- 涂珺徐国良李冰涛黎宇史秀明刘红宁
- 关键词：PPARΑ葛根芩连汤胰岛素抵抗转录组
- 葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研究被引量：26
- 2016年
- 该实验通过检测葛根对胰岛素抵抗(IR)3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗,甘油三脂(TG)含量及PPARγ,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4,FASn表达量的影响来探讨葛根调节糖脂代谢改善脂肪IR的作用机制。先采用3T3-L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,地塞米松诱导建立IR模型,将脂肪细胞分为正常组,IR模型组,罗格列酮阳性组,低、中、高剂量葛根含药血清组,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)法检测细胞培养液葡萄糖含量和甘油磷酸氧化酶(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)法测定胞内TG含量,荧光定量q PCR检测PPARγ,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4(a P2),FASn基因mRNA水平。结果显示1μmol·L^(-1)地塞米松作用3T3-L1脂肪细胞96 h,与正常组比较,模型组葡萄糖消耗量降低(P<0.01),胞内TG含量增加(P<0.01),由此确认建立IR模型;与IR组比较,葛根含药血清干预IR细胞24 h葡萄糖消耗量上升(P<0.01),胞内TG含量降低(P<0.01),中、高剂量葛根含药血清组升高PPARγ,ADPN和GLUT4表达(P<0.01),PPARγ与后两者基因表达呈现一致性。脂代谢相关基因检测结果显示仅高剂量葛根含药血清显著升高LPL表达(P<0.05);各剂量葛根含药血清下调FABP4表达(P<0.01);中、高剂量的葛根含药血清上调FASn基因表达(P<0.01)。该实验表明葛根提高IR-3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取能力,降低细胞内TG积聚,干预多个重要糖脂代谢基因,推测以PPARγ为中心多靶点调节糖脂代谢改善脂肪IR。
- 罗新新徐国良黎宇李冰涛涂珺
- 关键词：胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢
- 油酸诱导胰岛素抵抗HepG2细胞模型优化及小檗碱、黄芩苷、葛根素和甘草苷的体外降糖作用研究被引量：18
- 2017年
- 目的以油酸诱导脂代谢紊乱建立肝胰岛素抵抗(IR)细胞模型,研究中药单体成分小檗碱、黄芩苷、葛根素和甘草苷的体外降糖作用,为中药降糖组方或成分配伍优化提供研究基础。方法采用油酸不同浓度(0.1、0.2、0.5、1.0 mmol/L)及不同作用时间点(24、36、48 h)诱导HepG2细胞,建立IR-HepG2细胞模型,葡萄糖氧化酶法测定细胞葡萄糖消耗量,CCK-8法检测细胞活力,确立模型的油酸最佳诱导浓度及最佳作用时间;蒽酮法和三酰甘油氧化酶法检测IR模型细胞内肝糖原和三酰甘油水平;油红O染色检测细胞形态的变化;观察葡萄糖消耗量检测IR模型的稳定性。采用油酸最佳诱导浓度及最佳作用时间建立IR-HepG2细胞模型,研究不同剂量小檗碱、葛根素、黄芩苷和甘草苷对细胞葡萄糖消耗量、糖原含量、三酰甘油及细胞活力的影响。结果油酸诱导IR-HepG2细胞模型最佳浓度1 mmol/L,最佳作用时间24 h,此时与对照组比较,HepG2细胞肝糖原含量明显下降(P<0.001),三酰甘油显著上升(P<0.01),模型建立后可至少持续稳定36 h以上。与IR模型组比较,给药干预24 h后,不同浓度小檗碱(5、10、20、50μmol/L)、黄芩苷(1、5、10、20、50μmol/L)、葛根素(20、40、80、160μmol/L)和1μmol/L甘草苷显著增加葡萄糖消耗量(P<0.05、0.01、0.001)。与IR组比较,不同浓度小檗碱(10、20、50μmol/L)、黄芩苷(20、50μmol/L)、葛根素(10、20、80、160μmol/L)显著提高肝糖原含量(P<0.001);甘草苷升高糖原含量但是差异不显著。与对照组比较,除160μmol/L葛根素和1μmol/L黄芩苷显著抑制细胞活力(P<0.05)外,其他组对细胞活力的影响均不显著,结论 1 mmol/L油酸诱导24 h后能够建立稳定IR-HepG2细胞模型,适合作为高脂饮食诱导2型糖尿病的体外肝IR细胞模型。小檗碱、黄芩苷和葛根素显著增加油酸诱导的IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量和糖原合成,进而改善脂代谢诱发的肝IR
- 朱水兰黎宇严奉东涂珺
- 关键词：胰岛素抵抗HEPG2细胞小檗碱黄芩苷葛根素甘草苷
- 3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立、优化及分子指标鉴定被引量：8
- 2018年
- 目的探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)模型建立的条件、优化及分子指标鉴定。方法采用3-异丁基-1-黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)、地塞米松(Dexamethason,DEX)和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,跟踪观察其诱导分化过程中的形态变化,并采用油红O染色鉴定。采用DEX(1μmol·L^(-1))单独诱导及DEX(1μmol·L^(-1))+罗格列酮(Rosiglitazone,ROS,10μmol·L^(-1))联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)检测不同时间点细胞培养液中葡萄糖含量,确定IR-3T3-L1脂肪细胞模型的最佳诱导时间,考察3T3-L1脂肪细胞模型IR状态的稳定性;采用CCK-8法测定IR-3T3-L1脂肪细胞活性;采用甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)测定IR-3T3-L1细胞甘油三酯(Triglyceride,TG)含量;采用实时荧光定量PCR(q PCR)和Western Blot法分别检测IR-3T3-L1脂肪细胞的脂联素(Adiponectin,ADPN)及葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT4)的mRNA、蛋白质表达水平。结果 DEX诱导3T3-L1脂肪细胞96 h,葡萄糖消耗差值比例达最大为46.84%;DEX+ROS诱导72 h,葡萄糖消耗差值比例达最大为22.77%,可作为2种IR模型建立的最佳时间点。与正常组比较,DEX及DEX+ROS诱导建立的2种IR模型葡萄糖消耗量均显著降低(P<0.05,P<0.01),2种方法建立的IR-3T3-L1细胞模型60 h内均保持稳定;IR模型组细胞活性均无明显变化(P>0.05),2种诱导试剂对IR脂肪细胞活性均无明显影响;IR模型组TG含量均显著升高(P<0.01),DEX+ROS组TG含量明显高于DEX组;IR模型组ADPN、GLUT4 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P<0.01),且DEX组下调幅度较DEX+ROS组更加明显。结论 DEX单独诱导及DEX+ROS联合诱导2种方法均可建立稳定的IR-3T3-L1细胞模型,DEX诱导IR-3T3-L1细胞模型优于DEX+ROS,其机制可能与GLUT4及ADPN表达显著降低有关。
- 罗新新朱水兰黎宇涂珺
- 关键词：3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖转运蛋白4脂联素
