丁俐丹
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 犬脂肪干细胞膜片的构建及其复合富血小板纤维蛋白后的成骨能力
- 2017年
- 目的初步研究犬脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSCs)膜片的构建及其生物学特性对膜片复合富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)后成骨能力的影响。方法取犬腹股沟处的脂肪进行消化,分离培养成脂肪干细胞进行相关检测。将P3代细胞加入含抗坏血酸的成膜培养液培养2周以上,构建脂肪干细胞膜片,采用HE染色及扫描电镜对膜片进行形态学检测。提取静脉血PRF,分为细胞膜片复合PRF的实验组和膜片对照组,2组分别成骨诱导后进行ALP染色和茜素红染色,并于诱导后第3、5天,采用RT-PCR检测成骨相关基因ALP、Runx2的表达。结果体外分离培养脂肪干细胞,成功构建干细胞膜片。光镜下可见细胞极性排列紧密,细胞外基质分泌。扫描电镜可见膜片表面光滑,细胞紧密排列。HE染色可见蓝染细胞紧密相连,细胞外大量基质。成骨诱导后,ADSCs膜片复合PRF的实验组ALP表达及茜素红染色钙结节形成量明显优于ADSCs膜片对照组,实验组ALP、Runx2基因m RNA表达高于对照组。结论成功构建犬脂肪干细胞膜片,膜片复合PRF后具有更强的成骨能力。
- 唐世俊郑雷蕾秦朴丁俐丹杨兰陈杨胡赟
- 关键词：脂肪干细胞富血小板纤维蛋白
- 富血小板纤维蛋白生物学特性鉴定及其对脂肪干细胞增殖和分化的影响被引量：12
- 2017年
- 目的·探讨富血小板纤维蛋白(PRF)的生物学特性及其对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和分化的影响。方法·取比格犬静脉血制备PRF膜,进行大体、组织学和超微结构观察。比格犬腹股沟处提取、分离培养ADSCs并进行多向分化潜能鉴定。体外将PRF作用于自体ADSCs,分为PRF组和对照组。CCK-8检测细胞增殖。对2组细胞分别进行成骨诱导,于诱导前及诱导后第4、7日,采用RT-PCR检测成骨相关基因骨钙素(OCN)、骨桥素(OPN)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达;诱导7 d后进行碱性磷酸酶(ALP)活性检测。结果·PRF为乳白色的纤维蛋白凝胶,具有弹性和韧性;胶原纤维构成疏松多孔的三维立体网络结构,大量的白细胞、血小板网络其间。PRF组细胞增殖活性显著高于对照组。成骨诱导后,PRF组OCN、OPN、Col-Ⅰm RNA表达均显著升高,ALP活性表达增强。结论·PRF是具有三维网络结构的纤维蛋白,其富含的血小板可以缓慢释放生长因子;PRF对ADSCs的增殖和成骨分化具有促进作用。
- 丁俐丹胡赟唐世俊杨兰陈杨郑雷蕾
- 关键词：富血小板纤维蛋白脂肪干细胞纤维蛋白成骨
- 双磷酸盐对高糖环境下BMSCs自噬相关因子Beclin1和LC3Ⅱ影响的研究被引量：4
- 2018年
- 目的研究双磷酸盐对高糖环境下骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)自噬相关因子Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,LC3)Ⅱ的影响。方法 BMSCs体外分离与培养,进行成骨、成软骨及成脂三向分化诱导与鉴定,配置含浓度梯度10-6~10-9 mmol/L双磷酸盐的高糖(30mmol/L)培养基,采用CCK-8检测BMSCs的增殖活性后选定用于实验的双磷酸盐浓度为10-9 mmol/L。另取BMSCs分为3组:正常对照组(D-葡萄糖5.6mmol/L),高糖组(D-葡萄糖30mmol/L),高糖(D-葡萄糖30mmol/L)+双磷酸盐(10-9 mmol/L)组。用real time-PCR检测3组细胞LC3和Beclin1的基因表达,Western blot检测3组细胞LC3Ⅱ和Beclin1蛋白的表达水平,透射电镜观察自噬体。结果鉴定结果示所得BMSCs具有成骨、成软骨及成脂分化能力。高糖组LC3和Beclin1mRNA、LC3Ⅱ和Beclin1蛋白的表达较正常对照组增高(P<0.01),而高糖组+双磷酸盐组较高糖组低(P<0.05);透射电镜显示高糖组细胞中自噬体数量最多,高糖+双磷酸盐组其次,正常对照组最少。结论高糖环境下BMSCs自噬水平升高,而双磷酸盐能下调高糖环境下BMSCs自噬相关因子Beclin1和LC3Ⅱ的表达。
- 刘艳胡赟张夏丁俐丹唐世俊杨兰陈杨郑雷蕾
- 关键词：自噬双磷酸盐糖尿病性骨质疏松
