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草地早熟禾PpGA20ox1基因的克隆及表达分析被引量：4: 2017年; 利用RACE方法,从草地早熟禾叶片中克隆出1个GA20ox基因家族成员的cDNA序列,命名为PpGA20ox1,提交到Genbank,登录号为KX443595。PpGA20ox1开放阅读框长1095bp,编码含364个氨基酸的蛋白质序列;不含信号肽序列,为疏水蛋白,与黑麦草、小麦等物种的亲缘关系较近;用Gateway方法构建瞬时表达载体并注射烟草叶片观察亚细胞定位,发现其定位在细胞质和细胞核。用相对荧光定量qPCR方法研究基因的组织特异性及喷施赤霉素和烯效唑对基因表达的影响,结果表明PpGA20ox1基因在草地早熟禾叶片中表达量最高,根次之,叶鞘最少,且表达量受赤霉素和烯效唑抑制。; 闫蒙举甘露何春艳张兰尹淑霞; 关键词：草地早熟禾生物信息学亚细胞定位

日本结缕草ZjADH基因的克隆及表达分析被引量：10: 2016年; 采用RACE技术从日本结缕草中克隆出1个乙醇脱氢酶基因,命名为ZjADH(GenBank登录号为KT596065)。ZjADH与甘蔗、美洲蒺藜草和沟叶结缕草等ADH基因同源性均在90%以上,进化分析表明其与沟叶结缕草亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示,ZjADH定位于细胞质。实时荧光定量分析结果表明,ZjADH在日本结缕草根中表达量最高,ZjADH可响应ABA、MeJA和SA的诱导,在低温、干旱和高盐胁迫中发挥重要作用。; 滕珂李俊张兰郭蔚尔许立新晁跃辉; 关键词：乙醇脱氢酶基因日本结缕草亚细胞定位非生物胁迫激素

草地早熟禾PpGA2ox基因启动子的克隆及功能分析被引量：7: 2018年; 为了研究草地早熟禾(Poa pratensis L.)GA2-氧化酶基因(PpGA2ox)的启动子,利用染色体步移的方法从草地早熟禾中克隆得到1109bp的PpGA2ox基因启动子序列。Plant CARE在线预测结果表明该启动子序列中存在CAAT-box、TATA-box等启动子基本顺式作用元件以及响应干旱胁迫和茉莉酸甲酯诱导的调控元件。构建PpGA2ox基因启动子与GUS报告基因融合的植物表达载体转化拟南芥,阳性植株GUS组织化学染色结果表明PpGA2ox基因启动子可以驱动GUS基因在拟南芥中表达并且表达具有组织特异性。与对照相比,激素处理及非生物胁迫下GUS基因表达量发生变化,推测PpGA2ox基因的表达可受到激素及非生物胁迫调控。; 檀鹏辉滕珂李俊张兰尹淑霞; 关键词：草地早熟禾启动子 GUS染色

日本结缕草ZjADH基因对拟南芥的转化及其耐寒性分析被引量：5: 2016年; 为研究日本结缕草ZjADH基因是否与植物耐寒有关,通过DNA重组技术将ZjADH基因插入3302Y质粒中,成功构建了植物表达载体3302Y-ZjADH,通过农杆菌介导的花序侵染法获得具有草铵膦抗性的转基因植株。PCR和qRT-PCR鉴定表明,目的基因已整合入拟南芥基因组中并能够成功表达。对野生型和转基因拟南芥进行低温(4℃)处理和耐寒分析,结果表明,转基因拟南芥对低温胁迫的抵抗能力明显高于未转基因植株。在低温胁迫下,转基因拟南芥中脯氨酸的含量显著高于野生型植株,而活性氧的积累明显低于野生型植株;对转基因植物抗性相关基因的表达分析显示:转基因植物体内SOD、APX及LEA基因的表达水平明显高于未转基因植株,说明ZjADH基因可能通过提高转基因植物体内SOD、APX及LEA的表达活性来增强植物的抗寒性。综上所述,日本结缕草ZjADH基因的表达能够提高转基因植株的耐寒性,对ZjADH基因的研究也为进一步获得抗寒转基因日本结缕草植株奠定理论依据。; 张兰滕珂肖国增梁小红许立新尹淑霞晁跃辉; 关键词：转基因拟南芥低温胁迫脯氨酸

草地早熟禾叶绿素酶1基因PpCHL1的克隆和表达分析被引量：9: 2016年; 利用RACE技术首次从草地早熟禾中克隆出叶绿素酶1基因(PpCHL1)的全长cDNA序列,提交到GenBank,登录号为KU145126;其开放阅读框为951bp,编码361个氨基酸,等电点6.11,平均亲水指数0.084,属于疏水性酸性蛋白。高级结构分析表明,其具有脂肪酶家族的保守域及水解酶特异的功能活性位点。利用实时荧光定量PCR分析其在草地早熟禾根、茎和叶及三种植物生长调节剂脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达情况,结果显示PpCHL1基因在草地早熟禾不同组织的表达情况存在明显的组织差异性,叶中的表达量最高且受ABA、SA和MeJA诱导。; 张兰滕珂尹淑霞; 关键词：草地早熟禾克隆

草地早熟禾荧光定量PCR分析中内参基因的筛选被引量：13: 2017年; 为筛选出草地早熟禾实时荧光定量中的最适内参基因,利用实时荧光定量PCR技术,分析检测6个传统内参基因ACT、GAPDH、UBQ、EF-1α、18s rRNA和β-tublin在草地早熟禾不同组织器官、叶片不同发育期、非生物胁迫和不同激素诱导下mRNA的表达差异情况。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件综合评价6个候选内参基因的表达稳定性。结果表明,在不同组织、叶片不同发育期、激素诱导和非生物胁迫下,候选内参基因的表达稳定性存在差异。GAPDH在草地早熟禾不同组织器官中表达最为稳定;EF-1α在非生物胁迫下表达最为稳定;不同激素下首选β-tublin;在叶片不同发育期ACT表达最为稳定。综上所述,通过筛选出不同条件下适宜的内参基因不仅有助于提高草地早熟禾基因表达分析的准确性,也为早熟禾属植物其他内参基因的开发提供了理论参考。; 张兰檀鹏辉滕珂闫蒙举何春燕甘露尹淑霞; 关键词：草地早熟禾实时荧光定量PCR 内参基因

草地早熟禾PpGA2ox基因的克隆、亚细胞定位及表达分析被引量：6: 2017年; 利用RACE技术从草地早熟禾中克隆赤霉素合成代谢的关键酶GA2-氧化酶基因(PpGA2ox),提交到GenBank,登录号为KX254272。其开放阅读框为1047bp,编码348个氨基酸。系统进化分析表明,PpGA2ox与大麦、小麦及二穗短柄草中的GA2ox亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示,其编码的蛋白定位于细胞核和细胞质中。实时荧光定量分析表明,PpGA2ox在幼嫩叶片中的表达量最高,且受GA3、MeJA及IAA三种激素的诱导。; 檀鹏辉李俊陈小云张兰滕珂尹淑霞; 关键词：草地早熟禾克隆亚细胞定位

草地早熟禾查尔酮合成酶基因PpCHS1克隆、功能与表达分析被引量：9: 2018年; 以草地早熟禾转录组数据为基础,克隆得到PpCHS1基因cDNA序列。其包含查尔酮合成酶基因(CHS)家族保守区域,与山羊草、大麦等植物的查尔酮合成酶基因相似度高;属于疏水性蛋白,Ⅲ型聚酮合酶,具有同源二聚体结构,亚细胞定位结果显示基因编码的蛋白定位于细胞质。通过对PpCHS1进化和表达分析表明,其功能可能与花发育相关并能促进黄酮类物质的合成,受紫外线和高盐的诱导,同时在外施MeJA下持续高表达,推断PpCHS1可能参与非生物胁迫与生物胁迫的防御。; 何春艳甘露闫蒙举张兰苏浩天尹淑霞; 关键词：草地早熟禾查尔酮合成酶基因克隆亚细胞定位

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张兰