朱戈
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
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- 关键词：MDM2PHOSPHORYLATIONUBIQUITINHOMEOSTASIS
- 不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达
- 2011年
- 目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。
- 刘彤李洋朱戈李丰
- 关键词：原核表达融合蛋白
- hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达
- 2011年
- 目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4T-2表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3200bp。原核诱导出GST-hFAK并进行纯化;Western blot检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位。结论成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达。
- 李晓东郭冰玉朱戈李丰
- 关键词：蛋白质印迹融合蛋白免疫荧光胃癌
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- 文献传递
