陈艳红
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院检验医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅医学科研项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠CCL20 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法。方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P<0.05)。结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。
- 陈艳红朱晨露魏衍财秦伟田洁袁靖陈娟吴晶晶汤新逸许化溪王胜军
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
- 人IL-21 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2013年
- 目的:建立检测人白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescencequantitative PCR,qRT-PCR)方法。方法:分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),磁珠分选CD4+细胞,经PHA刺激后提取总RNA并逆转录成cDNA。采用qRT-PCR方法检测IL-21 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,应用该方法检测Graves病患者CD4+T细胞中IL-21 mRNA的相对表达水平。结果:建立了人IL-21 mRNA的实时荧光定量PCR检测方法。该法的熔解曲线为单峰,核酸电泳显示为一特异性条带。Graves病患者CD4+T细胞中IL-21 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。结论:建立的检测人IL-21 mRNA的实时荧光定量PCR方法灵敏性、特异性好,为进一步临床应用提供了实验基础。
- 朱晨露陈艳红魏衍财秦伟马洁许化溪王胜军
- 关键词：白细胞介素-21实时荧光定量PCRGRAVES病
- 小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定
- 2012年
- 目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
- 魏衍财朱晨露陈艳红秦伟田洁袁靖陈娟吴晶晶汤新逸Samuel Essien Baidoo许化溪王胜军
- 关键词：原核表达纯化
