刘艳
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠体内Th17细胞检测的意义被引量：6
- 2011年
- 目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-17在实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thy-roiditis,EAT)小鼠体内的变化。方法:利用小鼠甲状腺球蛋白(Tg)建立小鼠EAT模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例。采用qRT-PCR检测小鼠脾脏细胞中IL-17 mRNA水平。结果:EAT小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例为(2.44±0.56)%,明显高于正常对照组小鼠(1.12±0.37)%(t=2.712,P<0.05);EAT小鼠脾脏细胞中IL-17 mRNA的含量也明显高于正常对照组(t=3.458,P<0.05)。结论:Th17细胞及其相关细胞因子IL-17 mRNA水平在EAT小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。
- 马斌田洁刘艳刘青玲马洁汤新逸魏衍财吴彩云柳迎昭许化溪陈永昌王胜军
- 关键词：TH17细胞IL-17实验性自身免疫性甲状腺炎
- 小鼠GITR真核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的:构建小鼠GITR(mGITR)的真核表达载体,转染COS-7细胞表达小鼠GITR蛋白。方法:用TRIzol试剂抽提小鼠脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出GITR全长基因,构建真核重组载体pIRES2-EGFP-mGITR,经鉴定后采用脂质体介导DNA法转染COS-7细胞。结果:从小鼠脾细胞中成功扩增得到GITR全长基因。重组载体pIRES2-EGFP-mGITR转染COS-7细胞后,经荧光显微镜观察可见绿色荧光,提取蛋白后经蛋白质印迹鉴定有目的蛋白mGITR。结论:成功构建了小鼠GITR基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mGITR,转染COS-7细胞后mGITR蛋白获得成功表达。
- 沈培郑东刘艳田洁赵银霞刘青玲朱晨露马洁苏兆亮马斌许化溪王胜军
- 关键词：真核表达转染COS-7细胞
- 小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒。TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达。结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL。Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白。结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础。
- 马洁田洁刘艳刘青玲毛朝明焦志军许化溪王胜军
- 关键词：重组腺病毒病毒滴度
- 实时荧光定量PCR检测人IL-9 mRNA方法的建立及应用被引量：1
- 2010年
- 目的：建立检测人白介素-9（interleukin-9，IL-9）mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quantitative PCR，qRT—PCR）方法。方法：分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear ceils，PB—MC），经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA。扩增产物与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT—PCR方法检测IL-9mRNA的表达水平。评价该方法的线性及特异性，应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA表达水平。结果：建立了人IL-9的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。该法的标准曲线相关系数r^2为0．995～0．998，熔解随线分析产物为单峰。Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）。结论：建立的检测人IL-9 mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好，为进一步临床应用提供了实验基础。
- 杨先知史烨柳迎昭陈建国田洁刘艳刘青玲苏兆亮仝佳马斌马洁邵启祥许化溪王胜军
- 关键词：白细胞介素-9实时荧光定量PCRSYBR
- 胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞的检测及意义被引量：3
- 2010年
- 目的:研究Th17细胞及其相关细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在胶原诱导性关节炎(collagen-induced ar-thritis,CIA)小鼠体内的变化。方法:利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠CIA模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL-17的含量。结果:CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例分别为(3.19±0.70)%、(3.54±0.97)%,显著高于正常对照组的(0.95±0.34)%、(1.31±0.47)%,P<0.01。CIA小鼠血清中IL-17的含量也明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:Th17细胞及其分泌的细胞因子IL-17在CIA小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。
- 史烨马洁苏兆亮杨先知马斌田洁刘艳刘青玲邵启祥许化溪吕力为王胜军
- 关键词：TH17细胞白细胞介素-17胶原诱导性关节炎
- 抗hGITR_(aa27-165)多克隆抗体生物学活性的初步鉴定
- 2011年
- 目的:明确兔源性抗人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体胞外段的多克隆抗体(anti-hGITRaa27-165 PcAb)与人类天然GITR分子的结合能力及其对CD4+T细胞的生物学作用。方法:分离、刺激培养人外周血单个核细胞后,利用流式细胞术(FCM)检测anti-hGITRaa27-165 PcAb与细胞膜表面GITR分子的结合能力;免疫磁珠分离人外周血收集CD4+T细胞,以3H-TdR掺入试验分别检测在细胞刺激生长剂存在或不存在的情况下,anti-hGITRaa27-165PcAb对CD4+T细胞增殖的影响。结果:兔源性anti-hGITRaa27-165 PcAb可以与天然构象的GITR分子结合,且此种结合具有浓度依赖性;在细胞生长刺激因子存在或不存在情况下,该多抗均能促进CD4+T细胞增殖。结论:本室制备的兔源性anti-hGITRaa27-165 PcAb具有与天然分子结合的能力以及一定的生物学活性,进一步的研究可考虑将其应用于临床相关疾病的检测和治疗。
- 蔡玲刘艳张慧韩清珍郑东陈建国
- 关键词：多克隆抗体流式细胞术CD4+T细胞
- Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定
- 2011年
- 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化感受态DH10Bac细菌,在DH10Bac细菌内重组pFastBacHTA与杆粒发生转座。筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染Tn昆虫细胞株,获取完整的重组杆状病毒。反复感染Tn细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白,用Western blot法进行蛋白鉴定。结果:经核苷酸序列测定及PCR鉴定,成功地获得含GITRL基因的重组杆粒。在杆粒转染的Tn细胞中表现有细胞病变,推断转染成功并获得重组杆状病毒。Western blot法鉴定显示,在Mr20000处有特异性的蛋白条带。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了小鼠GITRL蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础。
- 马洁田洁刘青玲刘艳杨先知许化溪王胜军
- 关键词：杆状病毒真核表达小鼠
