李会帅
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：浙江工业大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：理学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- L-脯氨酸-4-羟化酶的异源表达和合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的条件优化被引量：3
- 2017年
- L-脯氨酸-4-羟化酶(L-Proline-4-hydroxylase,P4H)是依赖α-酮戊二酸(α-KG)和Fe2+的双加氧酶成员之一,在反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-hydroxy-L-proline,t-4Hyp)等重要手性化合物的生物合成中发挥关键作用。本研究构建了来源于Bradyrhizobium japonicum USDA 6的P4H重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28b-p4h BJ,SDS-PAGE和酶活检测结果表明,该菌株具有表达可溶性P4H和催化合成t-4Hyp的能力。通过优化,确定了该重组菌全细胞催化合成t-4Hyp较优的反应体系和条件:10 m L p H 6.5 80 mmol/LMES缓冲液、9 mmol/L L-Pro,6 mmol/L L-抗坏血酸,6 mmol/Lα-KG,0.8 mmol/L Fe SO4·7H2O,反应温度为35℃;在20 g/L湿细胞的催化反应中,t-4Hyp的合成量达到34.86 mg/L,比优化前(17.53 mg/L)提高了98.86%。该工作为进一步利用P4H生物催化法合成t-4Hyp奠定了一定的技术基础。
- 周海岩李会帅王培柳志强
- 关键词：双加氧酶生物合成生物催化
- 反式‑L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因、酶、载体、工程菌及应用
- 本发明公开了一种反式‑L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因、酶、载体、工程菌以及在催化L‑脯氨酸合成反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸中的应用。所述反式‑L‑脯氨酸‑4‑羟化酶的酶活达到1654.08U/L，比酶活为82.74U/mg湿细...
- 郑裕国周海岩王培李会帅柳志强
- 定点饱和突变提高L-脯氨酸-4-羟化酶的酶活被引量：2
- 2018年
- 为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和"热点"氨基酸分析,选择了7个位于"疏水口袋"附近的氨基酸残基(Y205,K207I241,F137,T142,V53和R45)进行定点饱和突变,得到P4H酶活力明显提高的突变型酶F137R和Y205K。采用F137R和Y205K催化转化0.35g/L L-脯氨酸产物4(Hyp质量浓度分别为55.09mg/L和52.29mg/L),比野生型酶分别提高了58%和50%。经过分子对接比较发现,突变型P4H的活性中心没有发生显著变化,酶活的提高可能是由于突变作用使蛋白构型发生了轻微改变,增加了该酶与底物或辅底物的亲和力引起的。该结果为进一步利用P4H生物合成4-Hyp提供了重要的理论基础。
- 周海岩周海岩王培李会帅
- 关键词：生物催化
- 反式-L-脯氨酸-4-羟化酶基因、酶、载体、工程菌及应用
- 本发明公开了一种反式‑L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因、酶、载体、工程菌以及在催化L‑脯氨酸合成反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸中的应用。所述反式‑L‑脯氨酸‑4‑羟化酶的酶活达到1654.08U/L，比酶活为82.74U/mg湿细...
- 郑裕国周海岩王培李会帅柳志强
- 文献传递
- 脯氨酸-4-羟化酶的异源表达及分子改造
- 反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-hydroxy-L-proline)是一种重要的非天然氨基酸,广泛应用于食品、化妆品、医药和化工等领域,市场需求呈现逐年递增的趋势,目前国内市场售价高达60多万元/吨。生物转化...
- 李会帅
- 关键词：异源表达
- 文献传递
