李玉佳
- 作品数：24 被引量：30H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所更多>>
- 发文基金：四川省国际科技合作与交流研究计划项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 构建CRISPR/Cas12a中sgRNA剪切活性筛选系统的方法
- 本发明公开了一种构建CRISPR/Cas12a中sgRNA剪切活性筛选系统的方法，包括如下步骤：(1)构建能同时表达Cas12a蛋白和sgRNA的基因编辑单质粒；(2)构建基于SSA检测sgRNA剪切活性的双荧光报告单质...
- 陈利民石耀强段晓琼李世林杨春晖李玉佳徐敏
- 寨卡病毒荧光定量PCR检测方法的建立与验证被引量：8
- 2019年
- 目的建立基于一步法实时荧光定量PCR技术的寨卡病毒检测方法。方法通过分析寨卡病毒全基因组核酸序列,根据其NS5基因片段,设计特异性引物,构建重组质粒,经体外转录后获得寨卡病毒RNA,即阳性标准品,建立标准曲线,利用RT-PCR方法对检测体系做灵敏性、重复性试验,以寨卡病毒GZ01毒株与Huh7.5.1细胞RNA混合或加入寨卡病毒的血浆标本对本方法测试。结果建立的标准曲线线性关系良好,灵敏度较高,检测下限可达0.1 PFU/mL,标准曲线方程:Y=-3.353X+36.345,相关系数(CV)可达0.999。该方法特异性较好,对登革病毒和丙肝病毒核酸检测无交叉反应,可检出寨卡病毒感染的细胞样品和血浆样品中的寨卡病毒。结论成功建立了1种基于实时荧光定量PCR的寨卡病毒核酸检测的高灵敏性方法。
- 赵航李玉佳李世林徐敏陈利民
- 关键词：荧光定量PCR核酸检测血液筛查
- 四种病毒灭活方法用于登革病毒灭活效果的比较被引量：1
- 2020年
- 目的评价常用病毒灭活方法对血液制品中登革病毒(DENV)的灭活效果。方法将单采新鲜冰冻血浆(FFP),人凝血因子Ⅷ(FⅧ)和静脉注射免疫球蛋白(IVIG)3种血浆及其制品中加入高滴度(8.00-9.25)的登革病毒液,分别采用亚甲蓝(MB)光化学法灭活FFP、有机溶剂/去污剂(S/D)法灭活FⅧ、低pH常温孵化法和巴氏消毒法灭活IVIG;以1×10~6/mL A549细胞接种于T25的培养瓶中作为病毒传代及滴度滴定指示细胞,将灭活前后的血浆及制品接种于A549细胞并检测其DENV滴度,并通过qRT-PCR对DENV RNA做定量检测;评估不同的灭活方法对DENV的灭活效果。结果 DENV滴度下降:MB光化学法灭活FFP下降滴度≥5.92 log,S/D法灭活FⅧ下降滴度≥5.17 log、巴氏法和低pH法灭活IVIG均下降滴度≥5.92 log,其中MB光化学法灭活FFP、SD灭活FⅧ及巴氏法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低1.25 log-2.25 log,低pH法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低0.17 log。所有血浆和血液制品样品经灭活后,在DENV宿主细胞上3代盲传后均未检测到DENV RNA。结论 4种常用病毒灭活方法均能有效灭活血浆及血液制品中的DENV。
- 李玉佳段晓琼王艳翠任凯叶海艳朱光祖罗观文张容
- 关键词：病毒灭活方法登革病毒亚甲蓝光化学法
- 基于CRISPR/Cas12a-LAMP快速可视化检测福氏志贺氏菌的方法和试剂盒
- 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a‑LAMP快速可视化检测福氏志贺氏菌的方法和试剂盒，本发明通过对LAMP的扩增方法与CRISPR/Cas12的检测方法结合成为CRISPR/Cas12a‑LAMP的分子检测试...
- 陈利民石耀强徐敏李玉佳杨春晖段晓琼李世林
- 文献传递
- 氯硝柳胺在制备治疗缓解小头症药物中的应用
- 本发明公开了氯硝柳胺在制备治疗缓解小头症药物中的应用，具体应用为制备减轻寨卡病毒感染所致小头症的药物。本发明实验证明氯硝柳胺抑制寨卡病毒感染的机制之一是激活线粒体吞噬，清除被病毒感染的线粒体，从而抑制ZIKV感染小头畸形...
- 陈利民黄怡可李世林段晓琼李玉佳徐敏杨春晖
- 一种输血科室用血液冷藏置放架
- 本实用新型涉及输血科室用具技术领域，具体涉及一种输血科室用血液冷藏置放架。包括箱体，箱体的一侧开口，开口处铰接有箱门，箱体内垂直设置有安装柱，安装柱上水平设置有若干圆形托盘，托盘上设置有若干圈同圆心的轨道，每个轨道内均设...
- 徐敏李世林杨春晖叶海艳段晓琼李玉佳
- 文献传递
- 一管化RPA-CRISPR/Cas12a可视化联合检测12种病原体的试剂盒
- 本发明公开了一种一管化RPA‑CRISPR/Cas12a可视化联合检测12种病原体的试剂盒，装置和检测方法。本发明通过将RPA的扩增方法与CRISPR/Cas12的检测方法结合，并借助石蜡设计了一管化RPA‑CRISPR...
- 陈利民谭琪石耀强徐敏李玉佳杨春晖段晓琼李世林
- 基于中国部分地区无偿献血人群宏基因组学的新发病原体分析被引量：2
- 2021年
- 目的分析中国无偿献血者宏基因组学及微生物组学,评估新发病原体对输血安全的潜在威胁。方法收集2012~2018年重庆市、广西壮族自治区柳州市、新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市、四川省绵阳市、湖北省武汉市、江苏省南京市、黑龙江省牡丹江市以及云南省德宏傣族景颇族自治州8个地区血站无偿献血者血浆标本12300(人)份(10 mL/份),以160份血样(0.1 mL/份)混合为1个单位做超速离心(32000 r/min,离心半径91.9 mm)后,用离心柱吸附法提取总DNA,构建文库并应用illumina Hiseq 4500做深度(二代、高通量)测序;通过与细菌、真菌、寄生虫和病毒的参考序列做序列对比,分析宏基因组数据,鉴定样本微生物的分类阶元,评估分析具有潜在危害的病原体。结果深度测序共获得clean data 632 GB,排在前3位的病原体为假单胞菌属细菌(0.5611%)、伯克霍尔德菌属细菌(0.4687%)及沙雷氏菌属细菌(4.2420%);可通过输血或血制品传播、具有潜在威胁的病原体则有人细小病毒B19(0.1266%)、利什曼原虫(1.3485%)、刚地弓形虫(0.6158%)等。结论对部分中国无偿献血人群的宏基因组学的分析,可揭示对于我国血液安全造成潜在危害的的病原体,并有针对性地开展新发传染病防控。
- 李昱辉高瞻李世林李玉佳黄杨陈利民黄梅万建华何伟兰毛伟蔡杰周静宇杨茹尹以靖郭艳丽何苗
- 关键词：无偿献血人群宏基因组学高通量测序新发传染病
- 干扰素刺激基因12a对寨卡病毒复制的影响及其作用机制被引量：1
- 2020年
- 目的探究干扰素刺激基因(ISG)12a对寨卡病毒(ZIKV)复制的影响和作用机制。方法通过质粒转染(2μg ISG12a)或者siRNA(20μmo/Ll)沉默分别上调或者抑制A549细胞(细胞密度2×10^5/mL)中ISG12a的表达,再用ZIKV(MOI=1)感染A549细胞,48 h后收样,采用RT-qPCR以及Western blot等方法检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含有干扰素刺激应答元件(ISRE)的萤火虫荧光报告质粒(ISRE-luc)和2 ng海肾荧光质粒(pRL-TK)与1μg的ISG12a质粒共转入2×10^5/mL的A549细胞中24 h,用ZIKV(MOI=1)感染A549细胞24 h,用终浓度为100 IU/mL IFNβ再处理细胞24 h后收样,用双荧光报告基因试验检测ISRE活性;在2×10^5/mL的A549细胞中转染2μg ISG12a质粒,24 h后用ZIKV(MOI=1)感染A549细胞24 h,用终浓度为100 IU/mL IFNβ再处理细胞24 h后收样,采用RT-qPCR检测各组(n=3)的ISG12a和ZIKV RNA的表达。结果过表达ISG12a或者沉默ISG12a使得实验组的ZIKV RNA相对于空载组的值为:0.438 8±0.011 3、1.884 0±0.176 7(P<0.01),使IFNβ及MDA5、RIG-I、TLR3、IFIT1、ISG15、MxA各组(n=3)的相对值为:1.925 2±0.294 0、3.847 1±0.245 3、3.535 2±0.461 3、3.584 0±0.243 2、17.304 3±0.963 7、19.393 5±5.074 6、21.909 3±1.941 6(P<0.01或<0.05);在感染ZIKV的情况下,过表达ISG12a后,用IFNβ处理细胞,与空载组相比,实验组的ZIKV RNA的相对值为:218.723 3±0.329 9、2.330 6±0.080 6(P<0.01),与不加IFNβ处理的实验组相比,加干扰素处理的实验组的ZIKV RNA的相对值为:1.312 9±0.010 4(P<0.05)。结论 ISG12a通过促进内源性IFNβ的产生和激活Ⅰ型干扰素信号通路从而抑制ZIKV的复制,并增强外源性IFNβ抗ZIKV活性。
- 朱安静李爽李玉佳李世林段晓琼杨春晖徐敏陈利民
- 关键词：干扰素Β
- 基于CRISPR/Cas12a-LAMP快速可视化检测福氏志贺氏菌的方法和试剂盒
- 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a‑LAMP快速可视化检测福氏志贺氏菌的方法和试剂盒，本发明通过对LAMP的扩增方法与CRISPR/Cas12的检测方法结合成为CRISPR/Cas12a‑LAMP的分子检测试...
- 陈利民石耀强徐敏李玉佳杨春晖段晓琼李世林
