焦悦
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项高等学校科技创新工程重大项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同物理和化学因素对重组人角质细胞生长因子2稳定性的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:研究重组人角质细胞生长因子2(rhKGF-2)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液及反复冻融因素对rhKGF-2稳定性的影响作用。方法:rhKGF-2在不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH4～9)、缓冲溶液(柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、吉斐氏缓冲溶液)及反复冻融条件下分别保存,采用RP-HPLC法检测rhKGF-2纯度,同时观察外观性状。结果:-20℃、4℃分别保存时,rhKGF-2的各项性质在观察期内都无明显变化;25℃时,rhKGF-2存放28d纯度较0h(100.00%)下降至(68.20±0.14)%;40℃时,rhKGF-2存放9h纯度较0h(100.00%)下降至(4.80±0.39)%。rhKGF-2(pH6.0)在25℃条件下保存90d纯度较0h(100.00%)下降至(79.20±0.12)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.05);pH值为4.0、9.0的rhKGF-2液体在25℃条件下分别保存120h纯度较0h(100.00%)下降至(15.60±0.30)%和(67.30±0.10)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2在柠檬酸缓冲液中25℃条件下保存60d纯度较0h(100.00%)下降至(79.20±0.15)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2原液反复冻融后其纯度变化差异无显著性(P>0.05)。结论:rhKGF-2在低温和pH6.0～7.0中性条件下稳定。高温、偏酸性和偏碱性条件下均不利于rhKGF-2稳定。柠檬酸缓冲液有利于rhKGF-2稳定。反复冻融对rhKGF-2稳定性影响不明显。
- 周鑫王晓杰田海山唐禄焦悦朱家楠王莘李校堃
- 关键词：重组人角质细胞生长因子-2纯度稳定性
- 重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用被引量：7
- 2010年
- 目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);各组日本大耳白兔于造模后以50μL药物滴眼,每日3次。7和14d裂隙灯观察角膜烧伤面积以及角膜新生血管的形成,MTT法检测角膜上皮细胞活性,免疫组化方法进行病理组织学检查。结果:碱烧伤后7和14d,KGF-2组角膜烧伤面积小于碱烧伤对照组,差异有显著性(P<0.01)。碱烧伤对照组7d角膜新生血管发生率为17.50%,KGF-2组为7.32%;碱烧伤对照组14d角膜新生血管发生率为41.67%,KGF-2组为32.50%。MTT检测结果显示:碱烧伤后7和14d,KGF-2组492nm吸光度与碱烧伤对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。碱烧伤后7和14d,病理切片HE染色显示:对照组角膜基质水肿,板层纤维排列松散、紊乱,炎症反应反复出现,角膜上皮层变薄,部分脱落,角膜内皮层内侧有大量成纤维细胞增生;KGF-2组碱烧伤后7d,角膜上皮细胞生长良好,基质轻度增厚,无明显的炎症反应;碱烧伤后14d,未出现炎症复发,角膜上皮细胞生长良好,排列整齐,角膜基质仅有轻度增厚。结论:外用旋滴25mg·mL-1KGF-2可加速角膜上皮损伤的恢复,减轻角膜烧伤的各种炎症反应症状;减轻角膜基质水肿和纤维化,同时KGF-2亦表现出显著的抑制角膜新生血管形成的作用;KGF-2有可能成为另一个对角膜上皮损伤具有重要调控作用的生长因子。
- 王晓杰周鑫田海山马吉胜焦悦张睿蔡敏倩钱焕文李校堃
- 关键词：角质细胞生长因子-2角膜上皮
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子-穿膜肽融合蛋白的克隆表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2010年
- 目的:高效表达并纯化具有生物学活性的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)-穿膜肽(tat)融合蛋白,为进一步开发基因工程药物提供实验依据。方法:通过双酶切方法,从质粒pMD18-T-aFGF-tat中获得aFGF-tat基因片段,并将aFGF-tat融合基因与原核表达载体pET3c连接后转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化,MTT法检测aFGF-tat融合蛋白对NIH3T3细胞的促增殖作用。结果:经酶切和基因测序证实获得的重组人aFGF-tat基因序列与GenBank报道的完全一致,构建的pET3c-aFGF-tat表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达aFGF-tat融合蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量与理论预期值相符,经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后蛋白纯度高于95%,Western blotting分析表达产物与人aFGF多克隆抗体具有特异结合能力,并能够促进NIH3T3细胞增殖。结论:成功表达重组人aFGF-tat融合蛋白工程菌,获得aFGF-tat纯蛋白,并证实aFGF-tat融合蛋白具有促细胞增殖活性。
- 张睿王晓杰王怡田海山焦悦高丽昌李婷婷李校堃
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子穿膜肽纯化活性检测
- bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价被引量：1
- 2011年
- 目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFGF生物蛋白海绵浸提液对NIH3T3细胞的促增值作用,用bFGF标准品计算bFGF生物蛋白海绵的相对百分效价,对该方法进行验证;以常温储存2、3和4年的bFGF生物蛋白海绵为供试品,以低温储存30d的bFGF生物蛋白海绵为标准对照,以不含bFGF生物蛋白海绵和bFGF的培养液为空白对照,测定各组生物学活性效价,比较不同储存时间bFGF生物蛋白海绵的体外生物学活性效价的稳定性。结果:bFGF生物蛋白海绵供试品浸提液随浓度增加其吸光度(A值)增高,即NIH3T3细胞增殖作用增加,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),与bFGF标准品比较差异无统计学意义(P>0.05);bFGF标准品和bFGF生物蛋白海绵在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)∕[1+(X/C)B]+D;常温条件下储存2、3和4年生物蛋白海绵体与低温储存30d比较,其生物学活性效价(U.mL-1)下降率分别为0.5%、0.6%和0.8%,均低于15%的国家标准。结论:bFGF生物蛋白海绵在体外能够促进NIH3T3细胞增殖,具有良好生物学活性;应用NIH3T3细胞检测bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性可作为常规检测方法;bFGF生物蛋白海绵常温储存2～4年稳定性良好。
- 焦悦王晓杰张睿蔡敏倩李婷婷高丽昌王珊珊李海燕李校堃
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子生物蛋白海绵生物学活性
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体的制备及其物理稳定性评价被引量：1
- 2012年
- 目的:确立重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)脂质体制备的最佳处方及工艺条件,研究其理化性质。方法:采用冻干再水化法,以磷脂与胆固醇质量之比、缓冲溶液pH值和均质时间为单因素,每个因素选取三水平进行实验,以药物包封率、物理稳定性和生物活性作为评价指标,确立优化脂质体制备的最佳处方及工艺条件。结果:采用最佳处方工艺条件,即磷脂与胆固醇的比例为20∶1,磷酸盐缓冲液pH值为6.5,高压均质时间为20min制备的rhaFGF脂质体,经测定其包封率(En)达81.79%±2.51%,物理稳定性参数(KE)为1.050%±0.342%,生物学活性为(6.521 0±0.617 1)×105 U.mL-1,粒子大小较均匀,粒径大多分布在100nm左右。结论:通过优化工艺条件制备的rhaFGF脂质体包封率高,在4℃保存条件下,渗漏率低且具有很好的物理稳定性及生物学活性。
- 滕跃田海山张睿焦悦李校堃
- 关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体包封率
