余杰
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：广东药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导的干扰ClC-3肝癌稳定细胞株的建立及其侵袭和迁移能力的改变被引量：1
- 2015年
- 目的建立慢病毒介导的靶向干扰电压门控氯通道3(voltage-gated chloride channel 3,Cl C-3)的稳定肝癌细胞株,并探讨其侵袭和迁移能力的改变。方法构建靶向Cl C-3的3个短发夹状RNA(short-hairpin RNA,sh RNA)慢病毒表达载体,293FT细胞包装慢病毒并测定滴度。重组慢病毒感染肝癌细胞株MHCC97H,筛选稳定干扰细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Cl C-3 m RNA和蛋白的表达以确定干扰效率。Transwell小室实验(含Matrigel和不含Matrigel)和细胞划痕实验检测Cl C-3基因被抑制后侵袭和迁移能力的改变。结果成功获得4种慢病毒,感染MHCC97细胞后,建立1株阴性对照细胞和3株Cl C-3稳定干扰细胞(MHCC97H/sh Cl C-3-1、sh Cl C-3-2和sh Cl C-3-3)。3株稳定干扰细胞Cl C-3 m RNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照细胞(P<0.01),MHCC97H/sh Cl C-3-2细胞对Cl C-3的抑制效果最好。与阴性对照细胞相比,MHCC97H/sh Cl C-3-2细胞侵袭和迁移能力都下降(P<0.01)。结论成功建立稳定干扰Cl C-3基因的肝癌细胞株,Cl C-3表达抑制会降低MHCC97H细胞的侵袭和迁移能力。
- 徐彬林嘉麟施静雯王施思余杰
- 关键词：肝癌细胞慢病毒载体RNA干扰
- ClC-3基因敲除小鼠的构建及鉴定
- 2017年
- 目的构建并鉴定ClC-3基因敲除小鼠,为研究ClC-3氯通道蛋白的生物学功能提供动物模型。方法将从2015年9月—2016年9月选取的6只赛业生物科技有限公司(广州)构建的ClC-3flox/+小鼠与2只Jackson实验室引进的Ubc-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为ClC-3flox/flox-Cre+及ClC-3flox/+-Cre+的小鼠。取鼠尾DNA,通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型。结果子代小鼠基因组DNA结果显示在357 bp与100 bp处均有条带,符合预期结果。结论该研究基于Cre/Loxp系统,利用loxp转基因的ClC-3flox/+小鼠和在全身表达Cre重组酶的Ubc-Cre小鼠,成功构建并鉴定了ClC-3基因敲除小鼠。
- 余杰毛建文徐彬
- 关键词：CLC-3基因敲除CRE/LOXP系统
- 耐药肿瘤细胞中ClC-3、P-gp的表达变化及相关性被引量：4
- 2016年
- 目的观察电压门控氯通道3(Cl C-3)、P-糖蛋白(P-gp)在耐药肿瘤细胞中的表达变化,并探讨其相关性。方法提取人肝癌细胞株BEL-7402及其氟尿嘧啶耐药株BEL-7402/FU、人结肠癌细胞株HCT-8及其紫杉醇耐药株HCT-8/T的总RNA和蛋白,用荧光定量PCR法检测细胞Cl C-3和多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达,Western blotting法检测细胞Cl C-3蛋白和P-gp的表达,采用线性相关分析Cl C-3蛋白和P-gp表达的相关性。结果耐药细胞BEL-7402/FU和HCT-8/T中Cl C-3、P-gp的mRNA和蛋白水平都高于相对应的非耐药细胞BEL-7402和HCT-8(P均<0.05),在耐药肿瘤细胞中,Cl C-3蛋白与P-gp表达呈正相关(r=0.98,P<0.05)。结论 Cl C-3、P-gp在耐药肿瘤细胞中呈高表达,二者表达水平呈正相关关系。
- 林嘉麟施静雯刘学强余杰徐彬
- 关键词：肝肿瘤结肠肿瘤P-糖蛋白肿瘤细胞
