张海青
- 作品数：10 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于CRISPR/Cas9系统的人膀胱癌细胞株METTL3-METTL14双基因敲除
- 目的:利用CRISPR/Cas9技术,构建RNA甲基化转移酶METTL3与METTL14基因同时敲除的T24人膀胱癌细胞株,为进一步研究人膀胱癌细胞中RNA的m6A修饰作用提供新的工具和手段。方法:设计并合成靶向METT...
- 杨帆张海青王敏纪卫东张文娟
- 关键词：慢病毒
- 文献传递
- 靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统及制备方法和应用
- 本发明涉及一种RNA编辑技术领域，尤指一种靶向RNA的6‑甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统及制备方法和应用，所述的载体系统包括失活的CasRx核酸酶融合6‑甲基腺嘌呤修饰酶的酶活性功能区的蛋白表达载体、寡核苷酸，以及包括...
- 纪卫东应小玲张海青
- 文献传递
- 一种靶向敲除FTO基因的sgRNA及CRISPR/Cas9慢病毒系统与应用
- 本发明公开了一种靶向敲除FTO基因的sgRNA及CRISPR/Cas9慢病毒系统与应用。该sgRNA选自DNA序列如下的FTOsgRNAsp2或FTOsgRNAsp3。该sgRNA对FTO基因的切割效率高。将含有该sgR...
- 纪卫东苏甲林阙彪张海青王敏
- 文献传递
- 人膀胱癌细胞RNA甲基转移酶双基因敲除模型构建与鉴定
- 2017年
- 目的采用常间回文重复序列丛集(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术,构建RNA甲基化转移酶(METTL)3与METTL14的基因同时敲除的人膀胱癌细胞株T24细胞,为职业性肿瘤的靶向基因干预提供新的工具与手段。方法设计并合成靶向METTL3和METTL14的小向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列,构建至Lenti-multiCRISPR载体;采用慢病毒系统将诱导型质粒Lenti-i Cas9-neo转染至T24细胞,以流式细胞术分选阳性克隆,将重组质粒Lenti-multi-METTL3-METTL14转染至阳性分选细胞并筛选,以免疫印迹法检测T24-Lenti-multi-CRISPR空载体细胞(对照组)、METTL3-METTL14双基因敲除T24细胞株T24-KO-METTL3-METTL14(双基因敲除组)的METTL3和METTL14蛋白的相对表达量。结果目的 sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的Lenti-multi-CRISPR质粒载体,测序正确;诱导型质粒Lenti-i Cas9-neo成功转染至T24细胞中,经流式分选获得大量阳性细胞;经强力霉素诱导后,获得METTL3-METTL14双基因敲除的稳定细胞株。强力霉素处理96 h后,双基因敲除组细胞的METTL3、METTL14蛋白相对表达量较对照组细胞分别下降52.08%和64.04%(P<0.01)。结论首次获得METTL3-METTL14双基因稳定敲除的T24细胞,为人膀胱癌细胞的候选基因干预靶点及膀胱癌的防治机制研究奠定基础。
- 杨帆张海青王敏纪卫东张文娟
- 关键词：基因敲除表观遗传膀胱癌T24细胞
- 靶向RNA甲基化的RNA Cas9-m6A修饰载体系统及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种靶向mRNA的6‑甲基腺嘌呤修饰载体系统，所述载体系统包括失活的Cas9核酸酶融合6‑甲基腺嘌呤修饰酶的酶活性功能区的蛋白表达载体、靶向CDCP1的mRNA的3’UTR区中至少一个位点的sgRNA表达载体...
- 纪卫东应小玲张海青王敏
- 文献传递
- 基于CRISPR/Cas9系统的人膀胱癌细胞株METTL3-METTL14双基因敲除
- [目的]利用CRISPR/Cas9技术，构建RNA甲基化转移酶METTL3与METTL14基因同时敲除的T24人膀胱癌细胞株，为进一步研究人膀胱癌细胞中RNA的m6A修饰作用提供新的工具和手段。[方法]设计并合成靶向ME...
- 杨帆张海青王敏纪卫东张文娟
- 关键词：慢病毒
- 一种靶向敲除FTO基因的sgRNA及CRISPR/Cas9慢病毒系统与应用
- 本发明公开了一种靶向敲除FTO基因的sgRNA及CRISPR/Cas9慢病毒系统与应用。该sgRNA选自DNA序列如下的FTOsgRNAsp2或FTOsgRNAsp3。该sgRNA对FTO基因的切割效率高。将含有该sgR...
- 纪卫东苏甲林阙彪张海青王敏
- 文献传递
- 人膀胱癌细胞RNA甲基转移酶双基因敲除模型构建与鉴定
- 目的：采用常间回文重复序列丛集(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术,构建RNA甲基化转移酶(METTL)3与METTL14的基因同时敲除的人膀胱癌细胞株T24细胞,为职业性肿瘤的靶向基因干预提供新的工...
- 杨帆张海青王敏纪卫东张文娟
- 关键词：膀胱癌基因治疗基因敲除
- 环状RNA在小鼠结肠炎诱导的结肠癌模型中的差异表达研究
- <正>目的:探讨环状RNA在AOM/DSS诱导的结肠癌小鼠模型结肠组织与正常小鼠结肠组织中表达谱的差异。方法:利用氧化偶氮甲烷-右旋糖酐硫酸酯钠(AOM/DSS)处理小鼠,成功建立结肠炎诱导的结肠癌模型,对该模型小鼠的环...
- 元刚陈庭佳张海青曹清华邱云阙彪彭穗陈旻湖纪卫东
- 文献传递
- 靶向RNA甲基化的RNA Cas9-m6A修饰载体系统及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种靶向mRNA的6‑甲基腺嘌呤修饰载体系统，所述载体系统包括失活的Cas9核酸酶融合6‑甲基腺嘌呤修饰酶的酶活性功能区的蛋白表达载体、靶向CDCP1的mRNA的3’UTR区中至少一个位点的sgRNA表达载体...
- 纪卫东应小玲张海青王敏
