王一平
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：郧阳医学院附属人民医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒介导的人内皮型一氧化氮合酶基因和增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达被引量：3
- 2008年
- 目的:研究腺病毒载体介导人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的表达。方法:体外培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,并对培养的细胞进行成骨、成脂肪诱导分化和细胞免疫表型鉴定;用Pme I线性化后去磷酸化的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ 5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定正确后经PacⅠ酶切,转入AD 293细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。用重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP对MSCs进行转染,并用荧光显微镜及免疫荧光染色法观察转染细胞内EGFP和heNOS蛋白质的表达。结果:pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ 5183中成功地发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒在AD 293细胞中包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。经基因转染的MSCs中高表达heNOS和EGFP。结论:采用腺病毒载体可以将外源性的heNOS基因转染至MSCs中,并得到有效表达,且携带的EGFP标记可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况,这将为勃起功能障碍的细胞治疗提供一条新的途径。
- 王一平谭艳王家宁张少峰郭凌郧孔霞罗超
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体间充质干细胞
- 腺病毒介导的人基质细胞衍生因子-1基因转移促进间充质干细胞的迁移被引量：4
- 2008年
- 目的初步探索在活体状态下基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓源间充质干细胞(MSC)迁移中的作用及其信号转导机制。方法以MSC为实验材料,将纯化的hSDF-1α重组腺病毒100!l加入单个散在分布的MSC培养基中,分别于转染后1,2,3d观察MSC迁移的变化。随后于hSDF-1α重组腺病毒转染MSC后12h,以50"nmol/L渥曼青霉素,10#mol/LLY294002,50$mol/LPD98059,10%mol/LU73122,0.1g/LAMD3100以及50nmol/L维拉帕米等分别处理MSC,观察转染SDF-1的MSC迁移的信号机制。结果转染SDF-1重组腺病毒的MSC呈聚集的集落样生长,渥曼青霉素、LY294002、PD98059、U70312、AMD3100、维拉帕米等处理后,MSC聚集的集落样生长趋势明显降低,尤以U73122、AMD3100对其阻断效应最为显著。结论SDF-1促进了MSC的迁移,其作用与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)和蛋白激酶C(PKC)等信号分子有关。
- 王一平唐俊明郭凌郧孔霞杨建业陈龙黄永章王家宁
- 关键词：腺病毒间充质干细胞迁移
