李江恒
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 供职机构：广西医科大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 长链非编码RNA lnc-GCLC-1稳定沉默的肝细胞株L02的构建与验证
- 2017年
- 目的利用慢病毒载体构建长链非编码RNA lnc-GCLC-1沉默的稳转L02肝细胞株,为研究lnc-GCLC-1功能提供基础。方法以lnc-GCLC-1为靶点,设计并合成4组双链发卡结构,分别与慢病毒载体psi-LVRH1GP连接构成重组质粒;转化感受态细胞获取大量重组质粒后电泳、测序鉴定;通过瞬时转染筛选出2个有效的短发卡RNA(sh RNA);将重组质粒转染293T细胞后,收集病毒液并感染L02细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。利用荧光显微镜观察细胞绿色荧光情况以检测转染效果,采用Real-time PCR鉴定转染细胞株,并检测lnc-GCLC-1沉默对GCLC m RNA表达的影响。结果电泳及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;sh RNA-2和sh RNA-4是有效的sh RNA;用0.5μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定低表达L02细胞株;在sh RNA-2和sh RNA-4稳定转染L02细胞株中,lnc-GCLC-1的表达水平均低于阴性载体组(P<0.05),沉默效率分别为21.3%和64.82%;sh RNA-2组和sh RNA-4组GCLC的m RNA表达量均低于阴性载体组(P<0.01)。结论本研究成功构建了lnc-GCLC-1沉默稳转L02细胞株。
- 李江恒农清清范誉朱雪凤廖娟胡新梅贾雪姣费梦雪黄秋月马智星
- 关键词：L02细胞慢病毒载体
- 广西地区原发性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR水平研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨广西地区原发性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR(MC-LR)的水平及其相关影响因素。方法选取2014年12月—2016年6月广西医科大学附属肿瘤医院收治的来自广西地区的144例原发性肝癌患者作为肝癌组,另选取同期本院体检健康者158例作为对照组。调查两组一般人口学特征、日常生活方式、饮食习惯等,并采集静脉血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清乙型肝炎病毒(HBV)感染标志物,包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb),以及MC-LR水平和谷胱甘肽(GSH)含量。结果肝癌组血清MC-LR水平为(0.078±0.039)μg/L,高于对照组的(0.061±0.041)μg/L(t=3.351,P<0.01)。肝癌组和对照组中不同性别、年龄、民族、HBsAg阳性、吸烟、饮酒情况者血清MC-LR水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);对照组中不同HBV感染者血清MC-LR水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);肝癌组和对照组中不同食鱼生、沟塘水饮用史者血清MC-LR水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝癌组GSH含量为(9.1±5.1)μg/L,低于对照组的(15.2±8.1)μg/L(t=-6.899,P<0.001)。按照对照组血清MC-LR的中位数(0.042μg/L)进行暴露程度分层,肝癌组低暴露和高暴露人群GSH含量比较,差异无统计学意义(t=-1.290,P=0.200);对照组低暴露人群GSH含量高于高暴露人群(t=2.090,P=0.038)。结论广西地区原发性肝癌患者血清MC-LR水平高于健康人群,GSH含量低于健康人群。MC-LR高暴露的健康人群血清GSH含量低于MC-LR低暴露人群。食用鱼生、长期饮用沟塘水可升高血清MC-LR水平。
- 胡新梅农清清赵惠柳廖娟朱雪凤李江恒费梦雪贾雪姣
- 关键词：肝肿瘤谷胱甘肽
- 微囊藻毒素-LR诱导的恶性转化肝细胞miRNA表达谱的变化被引量：3
- 2018年
- 目的构建微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)诱导的人永生化肝细胞株(WRL68细胞)恶性转化模型,检测mi RNA表达谱,寻找差异表达的mi RNA。方法用10 nmol/L MC-LR对WRL68细胞进行连续染毒至第25代,进行软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤实验。通过mi RNA芯片技术检测和分析对照WRL68细胞和恶性转化细胞的mi RNA表达谱;采用实时荧光定量PCR对芯片结果加以验证;应用Target Scan在线软件预测mi RNA可能调控的靶基因。结果第25代MC-LR染毒组细胞在软琼脂中可以形成集落,能在裸鼠皮下形成肿瘤。芯片检测分析显示,表达差异显著的mi RNA有54个,表达上调有35个,表达下调有19个。实时荧光定量PCR结果显示,hsa-mi R-140-3p、hsa-mi R-19b-1-5p、hsami R-203a和hsa-mi R-494均下调(P<0.05),与芯片检测结果趋势一致。以生物信息学技术分析mi R-494可能调控的靶基因,结果预测到3个与肿瘤相关的潜在靶基因,分别是肿瘤坏死因子受体相关因子3(TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)、微管相关肿瘤抑制基因(microtubule associated tumor suppressor 1,MTUS1)和结肠癌转移相关基因(metastasis associated in colon cancer 1,MACC1)。结论 MC-LR诱导肝细胞恶性转化过程中可引起mi RNA表达谱发生显著改变,差异表达的mi RNA可能在肝细胞恶性转化过程中起着重要作用。
- 朱雪凤农清清农清清李江恒贾雪姣李江恒贾雪姣黄秋月廖娟胡新梅
- 关键词：微囊藻毒素-LR细胞恶性转化MIRNA
- 广西南北两地水源水和饮用水中微囊藻毒素-LR含量调查被引量：2
- 2020年
- 目的比较广西北回归线两侧的南宁地区和桂林地区水源水和饮用水中微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)含量差异。方法于2017年采集南宁地区和桂林地区主要水源水及饮用水水样,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测水中MC-LR的含量。结果南宁地区与桂林地区水源水和饮用水中MC-LR平均含量均未超过我国地表水环境质量标准、饮用水卫生标准限值1μg/L。南北两地水库水中MC-LR平均含量均高于江河水、井水和山泉水(P<0.05)。南宁地区不同类型水源水MC-LR含量与桂林地区相比,水库水MC-LR平均含量较高,差异有统计学意义(P<0.05)。南北两地分散式供水末梢水中MC-LR平均含量均高于农村和城市集中式供水(P<0.05)。南宁地区的水源水和出厂水MC-LR平均含量分别为(0.256±0.048)、(0.210±0.025)μg/L,两者差异有统计学意义(P<0.05)。南宁地区水源水MC-LR含量在10月份达到峰值。结论广西南北两地水源水和饮用水中MC-LR含量均未超过国标中所规定的标准限值,南北两地水库水MC-LR含量存在明显差异,分散式供水MC-LR含量高于集中式供水。南宁地区水源水MC-LR平均含量高于出厂水,且在10月份达到峰值。提示需加强水源水和饮用水水质日常监测,秋季严格控制自来水处理工艺,以保证水质安全。
- 黄秋月农清清麦浩麦浩黄海李江恒贾雪姣马智星关斌
- 关键词：微囊藻毒素-LR水源水饮用水
- 广西肝癌高发区人群血清微囊藻毒素-LR水平及影响因素分析被引量：3
- 2016年
- 目的了解广西肝癌高发区健康人群血清微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)水平及其影响因素。方法于2015年6月,收集广西肝癌高发区健康人群103人、低发区健康人群100人的基本信息及静脉血,采用酶联免疫法检测血清MC-LR水平以及乙肝病毒表面抗原(HBs Ag),分析两组人群血清MC-LR水平及其相关影响因素。结果广西肝癌高发区健康人群血清MC-LR水平(0.088±0.040μg/L)高于低发区(0.028±0.013μg/L),差异有统计学意义(P<0.01);无论是肝癌高发区还是低发区,HBs Ag阳性人群与阴性人群血清MC-LR水平差异无统计学意义(P>0.05)。多重逐步线性回归分析结果显示,有塘边渗井水或沟塘水饮用史及本地鱼、鸭食用频率较高者血清中MC-LR水平较高。结论塘边渗井水或沟塘水饮用史及本地鱼、鸭食用频率高是广西肝癌高发区健康人群血清MC-LR水平升高的影响因素。
- 廖娟农清清胡新梅李江恒麦浩李云西范誉朱雪凤费梦雪贾雪姣
- 关键词：微囊藻毒素-LR血清影响因素肝癌
- 慢病毒介导的稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基基因的WRL68细胞株构建被引量：2
- 2015年
- 目的利用慢病毒载体构建稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的WRL68细胞株。方法采用PCR方法合成GCLC基因全长,经Not I、Nsi I酶切后克隆到慢病毒载体LV6上;采用PCR、酶切、测序鉴定重组质粒LV6-GCLC;将重组质粒转染293T细胞,收集培养上清并感染WRL68细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株。采用增强型绿色荧光蛋白检测转染情况,采用Real-time PCR及Western blotting鉴定所构建的细胞株;MTT法检测细胞活性;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞谷胱甘肽(GSH)含量。结果 PCR、酶切及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达,包装过表达慢病毒并检测其浓缩滴度为1.0×109 TU/ml;用1μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定过表达细胞株;GCLC过表达组中GCLC的m RNA和蛋白的表达量高于空载体转染组及对照组(P<0.05);GCLC过表达组、空载体转染组及对照组的细胞活性间比较,差异无统计学意义(P>0.05);GCLC过表达组GSH含量明显高于空载体转染组及对照组(P<0.05)。结论成功构建了稳定过表达人GCLC的WRL68细胞株。
- 范誉农清清廖娟胡新梅朱雪凤李江恒郭尧平陆继培
- 关键词：慢病毒载体过表达
