张皓
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：吉林省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 气肿疽梭菌鞭毛基因克隆载体的构建被引量：8
- 2015年
- 根据GenBank中发表的气肿疽鞭毛蛋白的结构基因FliA(C)的序列,从中截取抗原表位部分基因序列,设计合成1对引物,引物的5`和3`端分别加入了BamHⅠ和XhoⅠ2个酶切位点。通过降落PCR法扩增合成长度为429bp的目的基因片段。将PCR产物克隆于pMD18-T simple载体,之后将其转入大肠杆菌DH 5α感受态细胞筛选阳性克隆。提取扩增后的重组质粒pMD18-T-FliA(C)并进行PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定。结果表明:扩增的目的基因与GenBank登录的ATCC10092菌株序列同源性为99%,4个碱基不同,仅有1个氨基酸不同。测出的基因序列发表于GenBank,登录号为KF712490。试验证明用降落PCR方法能方便、快速、准确的获得目的基因片段。本试验成功构建了重组克隆载体pMD18-T-FliA(C),为气肿疽鞭毛蛋白的表达载体构建及鞭毛蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 张皓田金华朴明淑齐强刘昕昕李扬金鑫
- 关键词：降落PCR重组质粒基因克隆
- 气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果评价被引量：2
- 2019年
- 为了检测气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果,在成功构建pVAX1-NanA真核表达重组质粒的基础上将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达,并将成功构建的pVAX1-NanA质粒大量提取后免疫Balb/c小鼠,设置pVAX1-NanA核酸疫苗组、pVAX1空载体组和PBS对照组。对小鼠采血并分离血清,用ELISA测定血清中的IgG、IgG1、IgG2a抗体水平和IFN-γ、IL-4细胞因子水平;第3次免疫2周后,用流式细胞仪测定小鼠脾脏中的CD4^+和CD8^+T细胞水平。结果表明,pVAX1-NanA核酸疫苗免疫Balb/c小鼠后,小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P<0.01);IFN-γ和IL-4细胞因子水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P<0.01);CD4^+、CD8^+T细胞分析表明,pVAX1-NanA免疫组的CD4^+和CD8^+T细胞水平显著高于pVAX1组和PBS对照组(P<0.05),pVAX1-NanA核酸疫苗组的CD4^+/CD8^+T细胞比值高于pVAX1空载体组与PBS对照组(P<0.05),pVAX1空载体组和PBS对照组之间无显著差异(P>0.05)。试验成功制备了pVAX1-NanA核酸疫苗,且pVAX1-NanA核酸疫苗可刺激Balb/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫。
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- 关键词：气肿疽梭菌核酸疫苗免疫原性
- 气肿疽梭菌CctA基因的真核表达被引量：1
- 2018年
- 为了控制延边地区气肿疽病的发病率,制备出有效的核酸疫苗,根据NCBI上气肿疽梭菌细胞毒素A(CctA)的基因序列设计出一对特异性引物。将PCR扩增的CctA基因克隆到pMD19-Tsimple载体,对测序正确的基因进行序列分析,再次克隆至pcDNA3.1-1真核表达载体,并且将其转染Vero细胞。结果表明,pcDNA3.1-CctA组通过转染后的细胞存在绿色荧光的现象,同时pcDNA3.1-CctA重组质粒表达的产物大小约19ku,说明Vero细胞中的pcDNA3.1-CctA质粒成功表达了CctA蛋白。
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- 关键词：气肿疽梭菌真核表达
- 气肿疽研究综述被引量：2
- 2018年
- 近年来,国内外对于气肿疽的研究逐渐深入,尤其在构建气肿疽快速诊断检测方法方面取得了很大进展。为了提高人们对气肿疽的认识与了解,笔者结合国内外与气肿疽相关的参考文献,从病原学特点、主要临床症状及病理变化、流行病学特点、致病机理、检测方法、防控措施等方面进行了详细的综述。
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- 关键词：气肿疽病原学特点临床症状病理变化防控措施
- 气肿疽梭菌NanA基因克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2020年
- 为了对气肿疽梭菌NanA基因进行克隆及生物信息学分析,试验根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列设计并合成1对特异性引物,以气肿疽梭菌总DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD18-T载体中,对测序正确的NanA基因进行序列对比分析,对NanA蛋白进行理化性质分析与二级结构预测,同时使用在线软件预测NanA蛋白三级结构。结果表明:成功扩增出气肿疽梭菌Nan A基因,与参考序列相比,共存在3处核苷酸突变,核苷酸序列和氨基酸序列与NCBI公布的JF4135 NanA基因序列的同源性均为99.8%。NanA蛋白分子质量约为71 ku,具有较高的抗原指数,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,有多个抗原表位区域。
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- 关键词：气肿疽梭菌基因扩增克隆
- 气肿疽梭菌多克隆抗体的制备及Dot-ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2018年
- 为建立快速有效的气肿疽检测方法,制备气肿疽梭菌多克隆抗体。以斑点酶联免疫吸附方法,筛选出最佳工作条件,确定抗体最佳稀释度为1∶1 024;可检测到最低菌体抗原量为3.125μg,最低分泌抗原量为1.89μg;最适酶标二抗浓度为1∶4 000。应用该方法检测20份死于气肿疽的豚鼠脏器,其中肝脏、脾脏、心脏、肺脏、肾脏、肌肉阳性率分别为95%、95%、90%、90%、85%和90%;与琼脂免疫扩散试验(AGID)法相比,灵敏度是其40倍。该试验成功建立了检测气肿疽病原体的Dot-ELISA方法。
- 张皓姜永越陈竞于建华金鑫
- 关键词：气肿疽梭菌多克隆抗体DOT-ELISA
- 气肿疽延边株FliA基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2017年
- 为构建气肿疽延边株FliA基因的真核表达载体PVAX1-FliA,根据Genbank气肿疽鞭毛基因(登录号:AB058932)的参考序列,利用Primer 5.0设计1对引物,通过PCR扩增出完整的气肿疽延边株FliA基因。将目的基因与pMD-19T载体连接转化到大肠杆菌DH5α,进行测序、PCR、双酶切鉴定阳性克隆质粒。用回收后的基因与真核表达载体PVAX-1连接,并经双酶切、测序鉴定。本试验成功构建了鞭毛基因的重组真核表达载体PVAX1-FliA,为探讨气肿疽延边株FliA基因的分子生物学特性和功能及免疫新途径提供依据。
- 张永佳张皓李成辉金鑫
- 关键词：真核表达载体
- 气肿疽梭菌检测方法概述被引量：3
- 2017年
- 气肿疽(Clostridium chauvoei infection)病原体为气肿疽梭菌,是一种发生于反刍动物的急性、热性、败血性传染病。常见的典型症状为发病动物肌肉丰满部位发生炎性、气性肿胀,触压有捻发音,该病的流行有一定的地方性、季节性,多发生在潮湿的山谷、牧场,且在天气炎热的多雨季节。近几年常有暴发牛气肿疽的报道,给养殖业的发展带来了巨大的冲击和经济损失,同时也逐渐地威胁到畜牧生产和人类的安全。国内关于该病的研究多数为病例报道,对于该病的详细研究和综述却是少之又少,论文参考国内外相关文献,从方法、原理、优缺点等多个方面阐述气肿疽的检测方法,以期为该病的诊断提供参考。
- 张皓任春宇车达张永佳李成辉金鑫
- 关键词：气肿疽梭菌免疫学分子生物学
- 延边株气肿疽梭菌鞭毛蛋白FliA基因克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2017年
- 根据气肿疽鞭毛基因(GenBank登录号:AB058932)的参考序列,PCR扩增并克隆延边株气肿疽梭菌鞭毛蛋白FliA基因。成功克隆后测序,并采用生物信息学方法对鞭毛蛋白FliA基因的蛋白质二级结构、结构功能域、三级结构及抗原表位等重要参数进行了预测和分析。结果表明:与AB058932序列相比,存在38处突变,核苷酸序列的同源性和氨基酸序列的同源性均为97%;FliA蛋白的理论等电点为6.99,不存在跨膜区和信号肽序列,二级结构以α-螺旋和β-折叠为主,主要有15个潜在B细胞抗原表位区,17个限制性CTL抗原表位区。本试验为延边株气肿疽FliA蛋白功能的深入研究奠定了基础。
- 张永佳张皓李成辉金鑫
- 关键词：气肿疽梭菌克隆生物信息学分析
- 一例犬胫骨骨折的诊断及髓内针联合外固定支架的治疗被引量：3
- 2018年
- 骨折是骨组织的整体性、连续性由于外力和病理性因素破坏,使软组织受到不同程度的伤害,如神经血管、肌肉断裂挫伤、皮肤破裂等,但一般以血肿为主。骨折的固定有两种方法,第一种是外固定,第二种是内固定。内固定治疗骨折所需要的手术器材有髓内针、骨螺钉、金属丝和接骨板等,外固定需要硬化绷带、夹板绷带、改良托马斯绷带等,在正常情况下都应使用内固定对骨折进行开放复位治疗。
- 陈竞张皓李成辉于建华金鑫
- 关键词：骨折胫骨骨组织
