彭亮
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 红色荧光蛋白mCherry在衣原体感染模型中的应用被引量：1
- 2020年
- 目的建立红色荧光蛋白mCherry在衣原体中稳定表达的方法,并使用荧光菌株Cm-mCherry构建有效的衣原体感染模型。方法构建含有红色荧光蛋白mCherry的重组质粒pmCherry::CM,利用氯化钙法将pmCherry::CM转化至衣原体质粒缺失株CMUT中,经过筛选与纯化得到荧光菌株Cm-mCherry。Cm-mCherry感染HeLa229细胞后观察包涵体中红色荧光的发光情况,并与间接免疫荧光染色法比较,评估细胞感染模型构建是否成功;Cm-mCherry感染小鼠后,通过测定下生殖道载菌量、冷冻切片观察上生殖道衣原体红色荧光、分离生殖道评价输卵管积水发病情况,确定Cm-mCherry的感染力、侵袭力与致病性,评估动物感染模型构建是否成功。结果红色荧光蛋白mCherry在转化株Cm-mCherry中稳定表达,红色荧光蛋白标记法与间接免疫荧光染色法一致度高;Cm-mCherry小鼠感染模型中,感染率为100%(10/10),下生殖道载菌量可稳定保持高水平,在上生殖道冷冻切片中可观察到带有红色荧光的包涵体,输卵管积水发病程度与Cm野生株差异无统计学意义(P>0.05),证实Cm-mCherry有较好的感染力、侵袭力与致病性。结论成功建立红色荧光蛋白mCherry在衣原体中稳定表达的方法,转化后的荧光菌株Cm-mCherry有较好的感染力、侵袭力与致病性,可用于衣原体细胞、动物感染模型的构建,为研究衣原体感染机制提供良好的实验工具。
- 刘珊珊彭亮陈建林胡紫昊赵宇婕张婧张宏波
- 关键词：红色荧光蛋白MCHERRY衣原体基因表达
- 复方泛影葡胺速率区带密度梯度离心法纯化衣原体被引量：1
- 2020年
- 目的利用速率区带密度梯度离心法建立纯化高纯度、高感染力衣原体的方法。方法采用HeLa229细胞扩增衣原体,制作含有大量衣原体的细胞裂解液,以国产复方泛影葡胺作为介质,利用速率区带密度梯度离心法纯化衣原体,负染纯化产物后使用透射电镜观察形态,并将纯化产物感染HeLa229细胞,测定纯化产物的感染力。结果在透射电镜下观察,证实纯化产物为直径300 nm左右的高纯度原体。纯化产物的感染力为8.62×10~8 IFU/mL,证实该纯化产物具有高感染力。结论通过复方泛影葡胺速率区带密度梯度离心法,可获得高纯度、高感染力的衣原体,为开展衣原体感染机制、免疫反应等研究提供了有效而可靠的保证。
- 彭亮赵宇婕胡紫昊陈建林
- 关键词：泛影葡胺密度梯度离心法纯化衣原体
- 新型冠状病毒3CL水解酶的结构特征及其抗原表位分析被引量：3
- 2020年
- 新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)含有的3CLpro(3C-like protease)是由306个氨基酸构成的亲水性蛋白酶。3CLpro序列在冠状病毒中高度保守,对SARS-CoV-2的正常功能至关重要。为了深入了解3CL水解酶的结构特征及其抗原表位,本研究利用多种生物信息学软件分析了该酶的理化性质、亲/疏水性、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、SUMO化位点、二级结构和结构域、配体结合位点及B/T细胞的优势抗原表位,结果发现3CLpro不存在跨膜区,并推测含有糖基化位点2个、磷酸化位点27个、SUMO化位点3个;3CLpro的二级结构以α-螺旋和β-折叠为主,结构域包含一个endopeptidase/C30保守序列;3CLpro存在5个可能的配体结合位点和多个潜在的B/T细胞表位。此外,DrugBank数据库还预测到8个潜在的小分子药物。综上所述,本研究为新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)的药物和疫苗研制提供了理论基础。
- 王道彭亮
- 关键词：抗原表位生物信息学
