李煜 作品数:5 被引量:8 H指数:2 供职机构: 乌鲁木齐市新市区疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
抑制Keap1基因对染砷HaCaT细胞蛋白底物的影响 2017年 目的探讨抑制Keap1基因对染砷人永生化皮肤角质(HaCaT)细胞砷蛋白底物的影响。方法将人源性正常HaCaT细胞作为实验的空白对照组,Keap1抑制HaCaT细胞作为染毒组和阴性对照组,培养8、24、48、72h,对染毒组给予无机砷混合物进行染毒,分为高、中、低浓度组,各浓度组的染毒浓度为LC50的1/10(29μmol/L)、1/50(5.8μmol/L)和1/100(2.9μmol/L);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测砷处理细胞内同型半胱氨酸(HCY)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)、三价砷甲基转移酶(As3MT)N-6-腺嘌呤DNA甲基转移酶1(N6AMT1的蛋白含量。结果染砷8h,与阴性对照组比较,空白对照组、高浓度组SAM蛋白表达下调,低、中浓度组表达上调;低、中浓度组HCY蛋白表达上调,AS3MT蛋白在空白对照组、低浓度组表达上调,N6AMT1蛋白在空白对照组下调,低、中浓度组表达上调(P<0.012 5)。染砷24h,与阴性对照组比较,As3MT蛋白在低、中、高3个浓度组表达上调,SAM蛋白在空白对照组表达下调,低浓度组表达上调,高浓度组表达下调,HCY在空白对照组、低浓度组表达上调(P<0.012 5)。染砷48h,与阴性对照组比较,SAM、HCY的蛋白在低、中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在中浓度组表达上调,高浓度组表达下调(P<0.012 5)。染砷72h,与阴性对照组比较,SAM蛋白在空白组和高浓度组表达下调,低浓度组表达上调,AS3MT的蛋白在空白对照组、低和中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在空白对照组、高浓度组表达下调,在高浓度组SAM、As3MT、N6AMT1蛋白表达均下调(P<0.012 5)。结论 SAM和HCY蛋白表达在砷甲基代谢中表达有一致性;砷甲基化代谢中N6AMT1与AS3MT共同作用,其中N6AMT1起辅助作用;在高浓度、长时间的砷暴露中造成蛋白底物的耗竭,砷代谢发生障碍。 蒙好孝 赵雨欣 李煜 陈柔锦 郑玉建 吴军关键词:KEAP1 砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响 被引量:1 2015年 目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可� 陈柔锦 吴军 李煜 刘媛 葛龙 郎曼 郑玉建关键词:亚砷酸钠 基因 亚砷酸钠对皮肤细胞角化相关基因表达的影响 被引量:4 2016年 目的探讨亚砷酸钠对人角质形成细胞角化相关因子mRNA表达的影响,为进一步阐述砷致皮肤角化机制的研究提供依据。方法用浓度为0.00(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基培养HaCaT细胞24、48、72、96 h;采用MTT还原法检测细胞生长情况;采用实时荧光定量PCR法检测HaCaT细胞角蛋白1(Keratin1,K-1)、角蛋白10(Keratinl0,K-10)的mRNA的表达水平。结果 (1)1.30μmol/L的亚砷酸钠染毒能显著促进HaCaT细胞增殖,3.25μmol/L、6.50μmol/L的亚砷酸钠染毒48 h开始抑制HaCaT细胞的增殖,且与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)1.30μmol/L的亚砷酸钠染毒HaCaT细胞24 h能促进K1和K10mRNA的表达上调,3.25μmol/L、6.50μmol/L的亚砷酸钠染毒72 h可使HaCaT细胞中K1、K10 mRNA的表达显著下调,且与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论亚砷酸钠浓度<1.30μmol/L时,对人皮肤细胞的促增殖作用明显,促进皮肤角化进程;K1、K10的上调在皮肤细胞增殖和角化的过程中发挥一定作用。 李煜 吴军 郑玉建 陈柔锦 刘媛 葛龙 郎曼关键词:亚砷酸钠 HACAT细胞 角蛋白10 混合砷对Keap1抑制细胞Keap1/Nrf2-ARE和MAPK/ERK信号通路的影响 被引量:3 2017年 [目的]探究混合砷染毒对Keap1抑制的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)Keap1/Nrf2-ARE和MAPK/ERK信号通路的影响及对NF-κB基因表达的影响。[方法]细胞培养72 h,分为空白对照组(正常HaCaT细胞未染砷组)、阴性对照组(Keap1基因抑制且未染砷组)和3个Keap1基因抑制且混合砷染毒组,混合砷染毒浓度为2.9、5.8、29.0μmol/L;采用MTT法测定细胞生长情况;采用实时荧光定量PCR法测定HaCaT细胞Keap1、Nrf2、ERK、NF-κB的mRNA表达水平。[结果]混合砷染毒组与阴性对照组的细胞活力相比,差异具有统计学意义(F=483.9,P<0.05)。中、高浓度砷染毒组细胞活性受抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。混合砷染毒组与阴性对照组的Keap1 mRNA、Nrf2 mRNA相比,差异具有统计学意义(F=5.73,P=0.012;F=318.56,P<0.05)。Nrf2 mRNA表达呈低浓度时促进(P=0.038),中、高浓度砷染毒时抑制(P=0.014、P=0.016)。混合砷染毒组与阴性对照组的ERK、NF-κB mRNA相比,差异具有统计学意义(F=39.88,P<0.05;F=2 619.41,P<0.05)。低砷浓度染毒促进ERK基因表达(P=0.020),高砷浓度染毒则抑制其表达(P=0.003),差异有统计学意义。NF-κB基因表达与阴性对照组相比,低、中砷浓度时促进(P=0.030、P=0.032),高砷浓度时抑制(P=0.013),差异有统计学意义。[结论]Keap1抑制状况下,砷对HaCaT细胞中Nrf2、ERK和NF-κB基因表达呈低浓度时促进、高浓度时抑制的双向调节作用。 马瑶 白雪 李煜 陈柔锦 吴军关键词:砷 MAPK/ERK 核转录因子ΚB 砷对Keap1抑制HaCaT细胞凋亡及抗氧化水平的影响 被引量:1 2018年 目的基于抑制Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-assoicated protein 1,Keap1)基因,研究砷对人永生化角质形成细胞凋亡及抗氧化水平的影响。方法培养细胞72 h,分为5组:空白对照组、阴性对照(Keap1基因抑制未染砷)、Keap1基因抑制+低砷(2.9μmol/L)、Keap1基因抑制+中砷(5.8μmol/L)和Keap1基因抑制+高砷(29.0μmol/L)组;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用实时荧光定量聚合酶链式反应检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、Keap1 mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验检测谷胱甘肽、血红素氧化酶、环氧化酶、S-腺苷甲硫氨酸与同型半胱氨酸蛋白水平。结果 Nrf2和Keap1 mRNA表达不全相等(均有P<0.05);与阴性对照组相比,低砷组S-腺苷甲硫氨酸和同型半胱氨酸蛋白表达上调(均有P<0.05),血红素氧化酶蛋白在低、中、高砷组均上调(均有P<0.05),环氧化酶蛋白在中、高砷组上调(均有P<0.05),谷胱甘肽蛋白在高砷组上调(F=7.24,P=0.001)。结论基于Keap1基因抑制,砷暴露上调抗氧化酶活性,提高抗氧化水平,细胞凋亡下降;随着砷剂量增加,Nrf2表达下调,抗氧化水平失衡,细胞凋亡增加。 白雪 马瑶 李煜 陈柔锦 吴军 郑玉建关键词:砷暴露 HA T细胞 抗氧化