张露
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划黑龙江省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 大庆市某猪场猪瘟和链球菌混合感染的诊断被引量：3
- 2017年
- 猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性或慢性[1]、热性、高度接触性传染病。尽管许多发达国家已经宣布净化了猪瘟[2],但随着中国与其他国家贸易的增加,猪瘟的流行呈上升趋势。猪链球菌病（Streptococcus suis）是由链球菌属中致病性链球菌所导致的一种传染病[3],多发于312周龄的猪,尤其是断奶仔猪易感染此病,给养猪业造成了巨大的经济损失。
- 孙光野张露王珊珊侯喜林
- 关键词：致病性链球菌STREPTOCOCCUSCSFV蓝耳病病毒分离菌
- 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)核蛋白基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化与鉴定被引量：3
- 2016年
- 利用RT-PCR方法扩增出牛呼吸道合胞体病毒(BRV)核蛋白基因(N)中1 176bp的特异性片段,将目的片段定向克隆到pET-32a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)表达菌;经IPTG进行诱导,并探讨IPTG浓度、诱导时间对重组蛋白的影响。表达的大肠杆菌超声破碎后,沉淀物用含有1%TritonX-100的PBS溶液洗去膜碎片和膜蛋白。在尿素变性条件下,用镍柱亲和层析法纯化NP包涵体,并通过梯度透析方法进行透析复性,Western blot检测目的蛋白的反应原性。结果显示,酶切和测序成功构建阳性重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后发现该重组蛋白主要以包涵体形式存在于细菌中,大小约为60 000,最佳诱导条件为0.000 8 mol/L IPTG诱导4h。通过BCA法测定镍柱纯化的N蛋白质量浓度为0.534g/L,复性后质量浓度为0.397g/L。Western blot检测表明N蛋白具有反应原性。结果表明,在大肠杆菌中成功表达并纯化出N蛋白,并通过复性获得具有反应原性的N蛋白,为N蛋白下一步的应用奠定基础。
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- 关键词：包涵体复性
- 检测牛奶中布鲁氏菌套式PCR方法的建立被引量：2
- 2016年
- 为了建立一种快速检测牛奶中布鲁氏菌的方法,本研究采用套式PCR的方法,通过对PCR条件的优化,改进布鲁氏菌提取DNA方法,经验证,最佳退火温度50.1℃、dNTP最佳浓度为0.2 mM、引物最佳浓度为0.4μM、Taq DNA聚合酶最佳浓度为0.1μL、本方法最小检测菌数为8个。说明用套式PCR的方法提高了检测牛奶中布鲁氏菌的敏感性。
- 孙光野张露王珊珊侯喜林
- 关键词：布鲁氏菌套式PCR奶样
- 仔猪流行性腹泻继发巴氏杆菌感染的研究被引量：1
- 2017年
- 为了对吉林某规模化猪场仔猪临床表现为严重腹泻症状且死亡率较高的新生仔猪进行诊断,试验采用病毒检测、细菌分离试验、生化鉴定、动物回归试验、药敏试验、PCR扩增等对病原进行鉴定。结果表明:猪流行性腹泻病毒为阳性,猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒为阴性;从病死猪肺脏、脾脏和肝脏中分离获得高致病性多杀性巴氏杆菌,该菌仅对氧氟沙星、恩诺沙星高度敏感,对其他抗生素不敏感。通过该病流行情况和发病特征的调查及实验室诊断和动物回归试验等对病原的检测和分离,说明该猪场存在猪流行性腹泻继发巴氏杆菌的感染。
- 李艳婷张露高国强孙光野王珊珊刘秋晨余丽芸侯喜林
- 关键词：猪流行性腹泻病毒巴氏杆菌继发感染PCR扩增
- 犊牛轮状病毒和大肠杆菌混合感染检测被引量：8
- 2017年
- 黑龙江省某规模化奶牛场部分新生犊牛发生了严重腹泻且犊牛病死率较高。为了确诊,无菌采集病料,通过病毒检测、细菌分离、生化试验、细菌和病毒特异性基因PCR扩增、动物致病性试验及药敏试验等方法进行了病毒抗原和微生物检测。结果显示,病毒检测中牛轮状病毒(BRV)呈阳性,PCR扩增得到400bp的特异性片段;从病料中分离到1株含K99和F41兼性菌毛抗原的高致病性产肠毒素大肠杆菌(ETEC),该分离菌株对恩诺沙星、头孢唑啉、氯霉素敏感,对其他抗生素有一定的耐药性。流行情况调查结合病原学检查确诊该牛场新生犊牛严重腹泻是由BRV和大肠杆菌混合感染造成的,根据诊断结果进行了针对性地防制,取得了良好的防控效果。
- 李艳婷孙光野张露王珊珊高国强侯喜林
- 关键词：轮状病毒大肠杆菌药敏试验PCR检测
- 猪轮状病毒VP7蛋白在E.coli中的表达纯化被引量：5
- 2018年
- 为制备猪轮状病毒VP7蛋白的多抗,构建大肠杆菌表达载体pQE-30-VP7,表达猪轮状病毒VP7蛋白,纯化重组蛋白VP7并对其进行鉴定。利用RT-PCR方法扩增出猪轮状病毒VP7全长基因1062 bp,克隆到pMD18-T载体中,利用SalⅠ和HindⅢ消化重组DNA进行酶切鉴定,定向克隆到表达载体pQE-30中,转化E.coli BL21(DE3)株,经PCR和酶切鉴定阳性质粒,经IPTG(终浓度为1 mmo L·L-1)37℃进行诱导,Western blot和间接免疫荧光检测目的蛋白的反应原性。酶切和序列表明成功构建原核表达系统,重组大肠杆菌经IPTG诱导后,我们发现该重组蛋白主要以包涵体形式存在于细菌中,大小约为43 KDa,Western blot和间接免疫荧光分析表明该VP7重组蛋白可与Po RV阳性血清发生了特异性反应。
- 张露侯喜林余丽芸
- 关键词：猪轮状病毒VP7蛋白原核表达间接免疫荧光
