陆田珍
- 作品数:1 被引量:1H指数:1
- 供职机构:华南农业大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域:轻工技术与工程更多>>
- 抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达被引量:1
- 2011年
- 构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。
- 陈舒迟何永盛徐小艳陆田珍王弘
- 关键词:克伦特罗单链抗体毕赤酵母蛋白表达