陆益新
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：医药卫生农业科学环境科学与工程更多>>
- 比较两种RAD54启动子调控的全酵母发光细胞对化学诱变原的评价效果
- 2016年
- 通过分子生物学技术构建2种不同RAD54启动子调控的yEGFP重组报告载体p RAD54-yEGFP和p RAD54S-yEGFP,前者启动子DNA为1.8 kb,后者为0.5 kb,分别转入W303-1A酵母细胞,构建2种启动子调控的发光酵母细胞,用不同化学诱变原作用后,用流式细胞仪和多功能发光仪测定酵母的发光强度。结果发现2种启动子调控的酵母细胞的发光强度均与化学诱变原(甲磺酸甲脂、4-硝基-N-氧化喹啉和5-氟尿嘧啶)有明显的剂量效应关系,但是W303-1A/RAD54-yEGFP剂量效应关系较为明显,产生的最大诱导倍数(5.96、2.19和2.71)明显高于W303-1A/RAD54S-yEGFP所产生的最大诱导倍数(2.53、1.50和1.91),可能与启动子序列中转录因子的数量以及转录因子间协同增效作用有关。同时发现,流式细胞仪测定效果明显优于发光仪测定效果。所以在构建RAD54启动子调控重组酵母细胞筛选诱变时,选用全启动子序列效果较好。
- 田永杰徐秀举陆益新王超周天祺李湘鸣
- 关键词：酵母细胞绿色荧光蛋白剂量效应关系
- 密码子优化的隔孢伏革菌植酸酶基因在毕赤酵母中高效表达被引量：1
- 2015年
- 本研究目标是建立隔孢伏革菌植酸酶(6-phy A)分泌表达量高的毕赤酵母株,其作为饲料添加剂,可促进单胃类动物消化道对饲料磷的吸收,减少家畜粪便中磷对环境的污染,又可满足饲料加工的需要。按照毕赤酵母对遗传密码子的偏好性,利用重叠P CR方法人工合成6-phy A,将其插入到p PIC9K载体,构建成6-phy A整合型毕赤酵母表达载体,通过电转化转入G S115酵母细胞,并筛选出M ut+高拷贝转化子。通过S DS-PAGE分析,发现在该酵母细胞克隆株的发酵液中,见有一明显6-phy A条带,经测表达产物酶活性,发现均为对照酵母株的7.5倍以上,说明6-phy A在所构建的毕赤酵母株中成功、有效的表达。
- 陆益新王瑞鲲田永杰吴倩倩李湘鸣
- 关键词：毕赤酵母
- RNR2调控的红、绿荧光蛋白发光酵母细胞对化学诱变原筛选的研究
- 目的：建立RNR2启动子调控的红、绿荧光蛋白双信号发光酵母细胞高通量筛选化学诱变原。方法：用PCR方法从酵母(W303-1A)基因组扩增RNR2启动子,将其插入到含酵母嗜好遗传密码子的yEGFP报告载体(pRNR2-yE...
- 李湘鸣陆益新王瑞鲲吴倩倩
- 关键词：酵母细胞绿色荧光蛋白红色荧光蛋白
- 不同红色荧光蛋白在酵母细胞中的表达效果分析被引量：1
- 2015年
- 目的比较不同红色荧光蛋白基因在酵母细胞中的表达效果。方法利用分子生物学方法,构建了4种红色荧光蛋白(DsRed)基因酵母报告载体,分别是p GPD-DsRed、p GPD-DsRed-express-2、p GPD-y DsRed和p GPDy DsRed-express-2,后两者含有酵母细胞偏好性的密码子,将4种DsRed酵母报告载体转入W303-1A酵母细胞,利用倒置荧光显微镜观察DsRed的表达,并用多功能酶标仪测酵母细胞的发光强度。结果各红色荧光发光强度明显不同,其中DsRed-express-2发光最强,其次是y DsRed-express-2,y DsRed发光强度最弱。结论在酵母细胞中红色荧光蛋白的强度与密码子偏好性无关;定量红色荧光蛋白表达强度最好选用DsRed-express-2报告基因。
- 吴倩倩王劲松王瑞鲲陆益新李湘鸣
- 关键词：红色荧光蛋白密码子偏好性酵母细胞聚合酶链反应
- 筛选化学诱变原的RNR3调控重组LacZ基因酵母细胞的建立被引量：1
- 2014年
- 目的:建立可筛选化学诱变物的RNR3调控重组Lac Z基因酵母细胞。方法:利用降式PCR技术从酵母基因组中扩增RNR3启动子,将其插入到pMP206/ERE酵母报告载体,构建成RNR3调控的Lac Z酵母报告载体,将该载体转入W303-1A酵母细胞,构建成RNR3调控的重组Lac Z基因酵母细胞。用数种化学诱变原作用于该重组基因酵母细胞,观察其对RNR3的诱导表达。结果:放线菌素D、丝裂霉素C、阿非迪霉素和溴乙锭不能诱导RNR3的表达,而甲磺酸甲脂、瘤可宁、顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素、福莱霉素、5-氟尿嘧啶、喜树碱和羟基脲诱变原与RNR3表达有明显的剂量效应关系。结论:该重组酵母可用于对多种化学诱变原的快速筛选。
- 王瑞鲲葛宜枝陆益新吴倩倩李湘鸣
- 关键词：酵母Β-半乳糖苷酶LAC
