吴一飞
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 基于FPLC-LC-MS/MS分析嗜盐古菌Haloarcula hispanica胞内类泛素化底物
- 2017年
- 本研究结合SLIC克隆技术和快速蛋白质液相色谱-高效液相色谱-串联质谱(FPLC-LC-MS/MS)法,对嗜盐古菌Haloarcula hispanica类泛素蛋白ThiS的泛素化底物和缀合位点进行鉴定分析。采用SLIC克隆法构建类泛素蛋白ThiS表达质粒/整合质粒,经转染后的菌株在DMSO呼吸作用诱导下表达并纯化His6-ThiS蛋白缀合体。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,质粒型类泛素ThiS的表达远远高于基因型菌株的表达量,而通过定点突变,将ThiS的第89号位点突变成赖氨酸K和精氨酸R,进而使用胰蛋白酶对ThiS肽段上的赖氨酸残基-双甘氨肽标签进行酶切处理,采用LC-MS/MS法鉴定其底物和底物修饰位点。鉴定得到钼喋呤合成酶MoaE,蛋氨酸亚砜还原酶MsrA和其同系物MsrB,以及Fe-S簇组装蛋白SufB等4种底物蛋白。该方法通过结合蛋白位点突变和质谱检测,能够准确、有效地检测泛素/类泛素蛋白的修饰底物及其修饰位点,为深入泛素的生物性功能研究提供了切入点。
- 吴一飞韦露莎陈辉
- 关键词：嗜盐古菌
- 枯草芽孢杆菌木聚糖酶的克隆表达及其酶解两种木聚糖的产物分析被引量：2
- 2016年
- 通过基因克隆方法获得枯草芽孢杆菌木聚糖酶Xyn A,考察经镍离子亲和柱纯化后的Xyn A分别在桦木木聚糖和毛榉木木聚糖中的酶解情况,利用薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC）及基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF/MS）法鉴定木聚糖酶Xyn A的酶解产物。运用MALDI-TOF/MS分析枯草芽孢杆菌木聚糖酶Xyn A酶解桦木木聚糖和毛榉木木聚糖产物不同的聚合度寡糖的分布情况。结果表明：在桦木木聚糖酶解液中,产生的中性木寡糖主要为木二糖（X2）和木三糖（X3）,酸性木寡糖聚合度为412,并且每一个酸性木寡糖上仅连接着一个甲基葡萄糖醛酸侧链（Me G）。在毛榉木木聚糖酶解液中,产生的中性木寡糖与在桦木木聚糖酶解液中相同,酸性木寡糖的结构相似,聚合度为416。因此木聚糖酶Xyn A具有生产木二糖（X2）和木三糖（X3）以及酸性木寡糖（Me GXn）的功能。
- 韦露莎吴一飞陈辉
- 关键词：低聚木糖
