王怡
- 作品数：14 被引量：23H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 陆地棉GhMYB4基因沉默载体构建及转基因棉花的鉴定被引量：2
- 2021年
- MYB转录因子是植物中最大的转录家族之一,广泛参与植物逆境胁迫应答、生长发育及细胞形态的建成等生理活动。为了研究GhMYB4基因在棉花中的生物学功能,本研究利用重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiRMYB4前体的植物表达载体amiRGhMYB4-pCAMBIA3301,通过农杆菌介导喷花法转化棉花植株。Bar基因PCR检测获得19株阳性植株,319-3301引物PCR检测获得16株阳性植株,3301通用引物PCR检测获得7株阳性植株,综合3组引物检测结果共获得7株阳性植株,以上结果表明,已获得GhMYB4转基因棉花。本研究结果为进一步研究陆地棉GhMYB4基因棉花纤维发育机制提供材料基础。
- 王怡于月华刘晨万会娜王萍唐洁倪志勇
- 关键词：重叠PCR
- gma-miR4359b抑制载体的构建及表达模式分析
- 2022年
- MicroRNA在植物生长发育、逆境响应等多个方面具有重要的调控作用。相比保守的miRNA,存在于特定物种中的非保守性miRNA研究较少。研究发现非保守miRNA在调控作物经济性状和应对非生物胁迫等方面发挥重要作用。为了研究大豆非保守miRNA gma-miR4359b的生物学意义,本试验通过重叠PCR方法替换拟南芥内源性IPS1基因构建了抑制大豆非保守miRNA gma-miR4359b表达的mimicry4359b载体,采用RT-qPCR方法检测gma-miR4359b在大豆不同组织的相对表达量,结果表明gma-miR4359b在根中表达量最高。本研究结果为进一步研究gma-miR4359b的生物学功能与作用机制提供参考。
- 唐洁刘晨王怡于月华倪志勇
- 关键词：大豆
- 大豆Glyma08g11030启动子在拟南芥中的表达分析
- 2022年
- F-box蛋白在调控植物对逆境胁迫应答过程中具有重要功能。为研究大豆F-box蛋白Glyma08g11030基因启动子的表达特性,利用冻融法将Glyma08g11030植物表达载体质粒Glyma08g11030-pro-pCAMBIA3301转入农杆菌GV3101菌株。通过农杆菌介导的浸花法将Glyma08g11030启动子转化野生型拟南芥,经过含10%草甘膦(Basta)除草剂筛选获得转Glyma08g11030启动子阳性植株。对纯合的T代转基因拟南芥进行GUS组织化学染色,结果表明Glyma08g11030启动子驱动的GUS基因在转基因拟南芥发育5和7 d的幼苗、莲座叶、茎生叶、茎和花序中均表达。研究结果为进一步利用Glyma08g11030启动子驱动目的基因表达提供参考。
- 张承琪鹿瑞昭王怡倪志勇于月华
- 关键词：大豆启动子
- GhMYB4基因过量表达载体的构建及拟南芥转化
- 2019年
- 作为广泛参与植物体内的多种生理生化反应的MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,为阐明GhMYB4基因在棉纤维发育过程中的功能,本研究构建GhMYB4基因过量表达载体,以pGEM-T Easy-GhMYB4质粒为模板进行PCR扩增,成功将该基因构建到植物表达载体pEGAD中,并利用冻融法转入农杆菌GV3101菌株,通过农杆菌浸染法转化拟南芥植株,经过含草甘膦成分的除草剂筛选和PCR检测初步证明已获得转GhMYB4基因的拟南芥。为后期探讨转化棉花GhMYB4基因的生物学功能和棉花纤维发育机制提供理论参考。
- 王怡于月华邱迎风夏成林陈全家曲延英倪志勇
- 关键词：棉花植物表达载体构建拟南芥
- 海岛棉GbTCP5基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2017年
- 该研究根据前期海岛棉的转录组数据,通过PCR技术从海岛棉‘新海21’中克隆1个TCP基因,命名为GbTCP5,其开放阅读框945bp,编码314个氨基酸,预测分子量约34.95kD,等电点8.41;多序列比对结果表明,GbTCP5蛋白含有特征性的TCP保守结构域;进化树分析表明,GbTCP5基因与GhTCP17基因在同一分支。qPCR实验结果表明,GbTCP5基因在35d纤维中表达量较高,暗示其可能参与棉花纤维的次生壁合成。酵母单杂交实验表明,GbTCP5在SD-Trp-His-Ade缺陷培养基上生长并且X-gal检验显蓝色,说明该基因在酵母体内具有转录激活功能。
- 王怡郑凯于月华陈全家曲延英倪志勇
- 关键词：海岛棉TCP基因克隆转录激活
- 海岛棉GbTCP15基因的克隆与表达分析被引量：8
- 2016年
- 根据陆地棉GhTCP15基因序列,设计1对引物,通过PCR技术从海岛棉品种‘新海21号’中克隆一个同源基因,命名为GbTCP15。海岛棉GbTCP15基因具有一个1 056bp开放阅读框,编码351个氨基酸,预测分子量约为38 057.4kD,等电点为9.01,序列中含有一个高度保守的TCP结构域。氨基酸序列对比表明,海岛棉GbTCP15蛋白与其他植物中的TCP蛋白有较高的一致性,说明该基因在进化过程中是相当保守的。亚细胞定位结果显示,GbTCP15主要分布在细胞核上,推测GbTCP15在复制和转录的过程中发挥着信号转导以及转录调控等作用。进化树分析表明,海岛棉GbTCP15基因与雷蒙德氏棉GrTCP15基因分布在同一分支上。实时荧光定量PCR表明,海岛棉GbTCP15基因在茎部和15d纤维中表达量较高。研究表明,GbTCP15转录因子可能参与棉花纤维以及表皮毛的发育。
- 郑凯倪志勇曲延英王怡蔡永生陈全家
- 关键词：海岛棉TCP克隆
- GbTCP5与GbGL3启动子中TCP顺式作用元件的结合特性分析
- 2022年
- TCP转录因子是参与植物生长发育的特异性家族蛋白,但是棉花TCP转录因子家族中的大多数成员功能尚不清楚。为了定位GbTCP5转录因子调控的靶基因,本研究通过Plant CARE在线网站分析棉花纤维发育基因GbGL3上游3 000 bp启动子中的顺式作用元件,构建含有TCP顺式作用元件的载体PHISII-GbGL3和酵母表达载体p GADT7-GbTCP5,通过酵母单杂交分析GbTCP5与GbGL3启动子中TCP顺式作用元件的结合特性。结果表明:GbGL3上游3 000 bp启动子中包含TCP顺式用作元件和功能各异的顺式作用元件,酵母单杂交实验结果表明GbTCP5能够与GbGL3启动子中含有的TCP顺式用作元件结合。本研究为进一步了解GbTCP5转录因子的功能提供依据。
- 王怡于月华万会娜蔡永生倪志勇
- 关键词：酵母单杂交
- 大豆gma-miR4359b生物信息学分析及植物表达载体构建被引量：1
- 2020年
- MicroRNAs(miRNAs)在植物生长发育与逆境胁迫应答过程中具有重要作用,通过对大豆gma-mi-%R4359b的分析为其功能研究奠定基础。通过生物信息学对大豆gma-miR4359b的前体序列、启动子的顺式作用元件及靶基因进行分析,并构建了gma-mi R4359b植物表达载体。分析结果表明:大豆gma-miR4359b的前体序列长度为67 bp,成熟序列长度为24 bp。通过Plant-CARE网站分析gma-miR4359b启动子序列发现,在该区域除了存在基本启动子元件CAAT-box、TATA-box和TATA之外,还包括激素调控应答反应作用元件、非生物胁迫应答反应元件、参与光应答元件和伤害反应元件等。通过psRNATarget在线预测了gma-miR4359b的靶基因,推断gma-miR4359b可能参与其靶基因对细胞信号转导、细胞调控、翻译过程和非生物胁迫的调控。构建了包含gma-mi R4359b前体序列的gma-miR4359b-pCAMBIA3301植物表达载体。大豆gma-mi R4359b可能参与非生物胁迫响应,在植物生长发育过程中与逆境胁迫应答过程中起到重要作用。
- 刘晨唐洁王怡倪志勇于月华
- 关键词：大豆启动子植物表达载体
- 大豆GmNAC131基因的生物信息学及表达分析被引量：6
- 2021年
- NAC基因在多种作物中具有抵御生物与非生物胁迫的作用,为了分析大豆NAC131基因的功能,本研究从Williams 82大豆中克隆GmNAC131基因,对该基因及其编码蛋白质的特征、结构、功能及不同组织的表达量进行生物信息学分析;采用qRT-PCR方法分析非生物胁迫后不同时间段基因的诱导表达。结果表明:GmNAC131基因cDNA全长1 945 bp,开放阅读框长1 053 bp,编码350个氨基酸,蛋白质分子量为39.49 ku,等电点为7.62。GmNAC131基因组包含3个外显子和2个内含子。GmNAC131蛋白在16~166位氨基酸处含有1个高度保守的NAC结构域。编码蛋白中没有信号肽,没有跨膜结构,蛋白质组成具有疏水性。GmNAC131定位在细胞核中,具有8个糖基化位点和34个磷酸化位点。GmNAC131蛋白与野大豆、豇豆、绿豆及黧豆的NAC蛋白具有较高的相似性,与GsNAC在相同分支。转录组数据表明GmNAC131基因在大豆不同组织中都表达,在根中表达量最高,在叶中表达量最低。4℃低温胁迫24 h过程中GmNAC131基因表达量波动变化;250 mmol·L-1 NaCl胁迫12 h表达量出现最大值;30%PEG6000胁迫0.5 h表达量最高;100μmol·L-1ABA胁迫6 h表达量达到最大值。表明大豆该基因可能参与响应高盐和干旱等非生物胁迫。
- 万会娜于月华王怡倪志勇
- 关键词：大豆NAC转录因子非生物胁迫
- 棉花C_(3)HC_(4)型RING锌指蛋白基因GhSIZ1克隆及表达分析
- 2023年
- 植物抗逆分子机制非常复杂,克隆并鉴定新的逆境相关基因,有助于解析植物抗逆机理。C_(3)HC_(4)型锌指蛋白在植物生长发育和抵抗非生物胁迫中发挥重要作用。本研究从陆地棉‘Y1169’中克隆了1个C_(3)HC_(4)型锌指蛋白的基因GhSIZ1(XM_041085878.1),并分析GhSIZ1对干旱、盐胁迫和脱落酸的转录响应。序列分析表明该基因cDNA全长3389 bp,含有1个2613 bp的开放阅读框,利用生物信息学分析了棉花GhSIZ1基因的理化性质及其结构功能域,结果显示棉花GhSIZ1基因编码870个氨基酸,为亲水性蛋白,预测分子量约为279.39 k D,理论等电点为4.86,脂肪指数为29.06。GhSIZ1中含有1个C_(3)HC_(4)型RING锌指结构域。系统进化树分析表明Gh SIZ1与达尔文棉(Gossypium darwinii)TYG_87958.1、海岛棉(Gossypium barbadense)KAB_2050370.1和夏威夷棉(Gossypium tomentosum)TYH_93561.1等植物的蛋白质相似性较高,与达尔文棉TYG_87958.1处于同一进化枝上,亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示,GhSIZ1:GFP融合蛋白定位于细胞核中。实时荧光定量PCR分析表明在干旱、高盐和脱落酸处理后,GhSIZ1的表达量均先下降再上升,暗示棉花GhSIZ1基因与棉花抗逆有关。以上研究结果为进一步探究棉花抗逆机制提供了一定的参考。
- 曾佳聪王怡于月华倪志勇
- 关键词：陆地棉基因克隆锌指蛋白
