刘耀丹
- 作品数：12 被引量：41H指数：5
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Twist1与Jagged1基因在人卵巢癌A2780细胞顺铂耐药中的作用被引量：5
- 2017年
- 目的探讨碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist basic helix-loop-helix transcription factor 1,Twist1)与Notch信号通路配体Jagged1(Notch ligand Jagged-1,Jagged1)在人卵巢癌A2780细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法实验分为敏感组(人卵巢癌DDP敏感A2780细胞),耐药组(DDP耐药A2780/DDP细胞),转染组[应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术转染A2780/DDP细胞,干扰Twist1基因表达为A2780/DDP/si-Twist1、干扰Jagged1基因表达为A2780/DDP/si-Jagged1、空转不干扰Twist1及Jagged1基因表达为A2780/DDP/si-NC]。采用Western blot法检测3组Twist1、Jagged1蛋白表达水平;采用CCK-8比色法检测耐药组和转染组细胞DDP敏感性,生长曲线分析耐药组和转染组细胞增殖状况,流式细胞仪检测耐药组和转染组细胞凋亡情况。结果耐药组A2780/DDP细胞Twist1和Jagged1蛋白表达水平均高于敏感组A2780细胞(P<0.05);转染组A2780/DDP/si-Twist1细胞Twist1和Jagged1蛋白表达水平均低于耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞(P<0.05);转染组A2789/DDP/si-Jagged1细胞Jagged1蛋白表达水平低于耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞(P<0.05),Twist1蛋白表达水平与耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组A2780/DDP/si-Twist1细胞对DDP的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)[(19.53±0.32)mg/L]低于耐药组A2780/DDP细胞[(30.57±0.27)mg/L]和转染组A2780/DDP/si-NC细胞[(29.61±0.35)mg/L],细胞凋亡率[(34.74±3.15)%]高于耐药组A2780/DDP细胞[(21.56±1.99)%]和转染组A2780/DDP/si-NC细胞[(23.49±2.27)%](P<0.05)。结论 Twist1可通过调控Jagged1基因表达,介导人卵巢癌A2780细胞的增殖和凋亡,参与对DDP耐药的调节。
- 杨将邢辉洪莉卢丹华李倩男刘耀丹何松明
- 关键词：卵巢癌A2780细胞JAGGED1小干扰RNA顺铂耐药
- 间充质干细胞衰老机制的研究进展
- 2018年
- 间充质干细胞（MSCs）具有多向分化潜能,然而随着年龄的增加,其数量和功能会相应下降,从而影响机体生物学功能,最终导致衰老和死亡。因此,为了进一步阐述MCSs细胞衰老的特性,本文就MSCs分化与其衰老表现最新进展,MSCs衰老过程中的内在改变如端粒缩短、表观遗传表型改变、基因和信号通路及其免疫特性变化,以及延缓MSCs衰老的手段等进行总结。以期为深入认识MSCs衰老本质,对合理临床应用提供理论依据和启示。
- 刘耀丹洪莉李洋
- 关键词：间充质干细胞衰老抗衰老
- 盆底电刺激技术的机制研究及临床应用进展被引量：12
- 2017年
- 女性盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunction,PFD)是以盆底支持结构缺陷、损伤而导致的以盆腔器官脱垂、尿失禁、粪失禁、性功能异常及慢性盆腔痛为主要症状的一组症候群,严重影响患者的生活质量。临床研究证明,盆底电刺激(pelvic floor electrical stimulation,PES)对改善PFD患者的盆底功能和提高生活质量具有促进作用,但其作用机制尚不清楚。本文根据近年来的文献,就PES的技术方法、在治疗PFD中的作用机制和临床应用方面的最新研究结果进行综述。
- 刘耀丹洪莉
- 关键词：盆底电刺激盆底功能障碍性疾病
- 利用慢病毒载体建立过表达Nfe2l2基因的L929细胞株实验研究
- 2018年
- 目的利用慢病毒载体建立过表达Nfe2l2基因的L929细胞株,为探讨Nfe2l2基因在结缔组织成纤维细胞细胞外基质(ECM)重构中的作用奠定实验基础。方法 2014年12月—2015年5月,通过双酶切将Nfe2l2目的基因连接到GV341载体(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin),经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV341载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-Nfe2l2,病毒感染L929细胞72 h后筛选稳定表达的细胞株L929/LV-Nfe2l2,采用Realtime qPCR测定Nfe2l2的表达。结果经比对,构建的LV-Nfe2l2阳性克隆序列与目的基因Nfe2l2相符;L929细胞达到80%感染效率的最佳感染条件为:在ENi.S培养基中进行感染,设定感染复数(MOI)为8～10,感染时间为72 h。Real-time qPCR结果显示,经筛选的L929/LV-Nfe2l2细胞中Nfe2l2基因表达丰度为高(ΔCt值≤12)。结论本研究成功构建了一种过表达Nfe2l2基因的慢病毒载体;LV-Nfe2l2感染L929细胞后可实现目的基因的高表达,经筛选的L929/LV-Nfe2l2细胞株可用于后续实验研究。
- 刘成汤剑明李洋杨将李倩男刘耀丹洪莉
- 关键词：转染慢病毒属成纤维细胞细胞外基质
- 医学研究生科研论文数据处理与图表制作的认知现状及教学需求分析被引量：2
- 2017年
- 目的为了解医学研究生对于科研论文数据处理与图表制作的认知现状、教学现状及其需求，从而为合理设置相关课程的教学内容及形式提供客观依据。方法针对我院3个年级随机抽取的150名临床医学专业在读研究生进行自填式问卷调查并进行分析，了解不同层次和不同类别的研究生对科研论文中数据处理与图表制作的认知情况和教学需求情况。采用EpiData软件进行数据录入和整理，采用SPSS22．0进行描述性分析及卡方检验。结果64．08％（110人）的研究生会使用统计软件，但能熟练运用者仅有32．39％（32人），其中硕士研究生熟练运用者较博士研究生少（P〈0．05），学术型研究生熟练运用者较专业型研究生少（P〈0．05）；此外，90．14％（128人）的研究生认为科研论文数据处理与图表制作相关课程非常重要，同时82．39％（117人）支持开设相关课程。结论研究生的科研能力培养直接影响科学研究水平，而根据研究生对科研论文数据处理与图表制作的需求开设相关课程，对增强高等医学教育的教学改革和教学质量的提高具有重要意义。
- 刘耀丹洪莉胡鸣闵洁李素廷
- 关键词：科研论文数据处理医学教育
- 电刺激对小鼠成纤维细胞L 929机械力损伤的保护作用
- 2018年
- 目的探讨电刺激(electrical stimulation,ES)对机械力诱导的小鼠成纤维细胞L 929氧化损伤的保护作用。方法将小鼠成纤维细胞L 929分为正常对照组、电刺激组、加力模型组和加力后电刺激组。采用CCK-8法检测细胞活性,间接化学荧光法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量变化,JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化,分光光度法测定Caspase-3酶活性变化。结果加力组细胞活性明显下降,细胞内ROS增加,线粒体膜电位下降,Caspase-3酶活性增强,差异均有统计学意义(P <0.05)。与加力组相比,加力后电刺激组细胞活性增强,线粒体膜电位水平上升,细胞内ROS含量减少,Caspase-3酶活性减弱,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论电刺激可通过维持细胞活性、减少细胞凋亡、减少细胞内ROS含量及Caspase-3酶活性,而对机械力诱导的细胞氧化损伤起到一定的保护作用。
- 刘耀丹洪莉李洋李素廷
- 关键词：电刺激CASPASE-3
- 不同频率电刺激对压力性尿失禁模型小鼠盆底组织胶原代谢的影响被引量：9
- 2018年
- 目的：探讨电刺激对阴道扩张法（VD）诱导的压力性尿失禁（SUI）模型小鼠盆底组织胶原代谢的影响。方法：对SUI模型小鼠施加7d20Hz或50Hz频率电刺激（ES）后,测定尿动力学指标评价造模效果、采用免疫荧光双标法和Western-blot法检测电刺激前后小鼠盆底组织Ⅰ型胶原（ColⅠ）和Ⅲ型胶原（ColⅢ）含量变化。结果：与对照组相比,VD组小鼠的最大膀胱容量（MBC）和漏尿点压（LPPs）值明显增高（P〈0.001）,ColⅠ和ColⅢ相对荧光值和蛋白表达明显降低（P〈0.001）,且Ⅰ/Ⅲ胶原比降低,胶原形态疏松紊乱;与VD组比较,VD＋ES处理之后小鼠MBC和LPPs值明显增高（P〈0.01,P〈0.001）,ColⅠ和ColⅢ相对荧光值明显增加（P〈0.05,P〈0.01）、Ⅰ/Ⅲ胶原比升高（P〈0.01,P〈0.001）其中VD＋ES50组相对荧光值和蛋白表达增加量（P〈0.01）较VD＋ES20组（P〈0.05）多。结论：电刺激治疗能有效改善SUI模型鼠膀胱储尿功能及尿道控尿功能,其中50 Hz的高频电刺激效果更为显著,其机制可能与促进小鼠盆底组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的代谢有关。
- 刘耀丹洪莉李洋李素廷王婷婷
- 关键词：电刺激阴道扩张压力性尿失禁尿动力学胶原
- 电刺激对压力性尿失禁鼠模型阴道前壁Calpain 2和胶原的影响被引量：2
- 2019年
- 目的通过模拟临床盆底电刺激(electrical stimulation,ES)治疗压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)的方法,分析ES对小鼠阴道前壁中Calpain 2和胶原的代谢影响。方法实验分为对照组(CON组)、SUI组、SUI+ES 50 Hz组,每组20只小鼠。构建小鼠SUI模型并进行造模评价,ES后取阴道前壁组织,应用Western Blot和RT-PCR方法比较3组组织中Calpain 2和胶原的表达变化,并在蛋白水平分析各组中Calpain 2与胶原Ⅰ、胶原Ⅲ相关性。结果 SUI+ES 50 Hz组小鼠阴道前壁Calpain 2的蛋白表达含量及mRNA均较SUI组显著升高(P<0.05),SUI组胶原Ⅰ、Ⅲ的蛋白表达、mRNA水平与CON组相比较显著降低(P<0.05),SUI+ES 50 Hz组经ES治疗后胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白、mRNA表达水平有所升高(P<0.05)。且在蛋白水平SUI+ES 50 Hz组中Calpain 2与胶原Ⅰ、胶原Ⅲ呈明显正相关(r=0.7251,P=0.0003;r=0.6869,P=0.0008)。结论 ES治疗可激活SUI盆底组织中Calpain 2蛋白,增加胶原含量;且在ES治疗SUI中,Calpain 2的变化与胶原变化密切相关,可能参与其治疗机制。
- 王婷婷李洋阳莲刘耀丹李素廷洪莉
- 关键词：电刺激SUICALPAIN
- 电刺激对小鼠成纤维细胞L929细胞活性、衰老及凋亡的影响被引量：5
- 2017年
- 目的观察不同强度及作用时长的电刺激对小鼠成纤维细胞L 929细胞活性、衰老及凋亡的影响。方法实验于2016年7~10月在武汉大学人民医院中心实验室进行。根据电刺激时长的不同,将小鼠成纤维细胞L 929细胞分为0 h组、2 h组、4 h组、6 h组,其中0 h组为对照组;根据电刺激强度的差异再将每组细胞分为50 mV/mm、100 mV/mm、200 mV/mm组,共计12组。采用CCK-8试剂盒、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测其活性、衰老及凋亡,每组实验重复4次。结果与对照组相比,50 mV/mm 4 h与6 h组、100 mV/mm 2 h组细胞活性增高(P<0.05),而50 mV/mm 2 h组、100 mV/mm 6 h组、200 mV/mm 2 h与6 h组细胞活性下降(P<0.05),100 mV/mm 4 h组、200 mV/mm 4 h组细胞活性变化不明显;100 mV/mm 2 h组细胞衰老率降低(P<0.05),而50 mV/mm 2 h、4 h、6 h组、100 mV/mm 6 h组、200 mV/mm 4 h与6 h组细胞衰老率升高(P<0.05),100 mV/mm 4 h组、200 mV/mm 2 h组细胞衰老率变化不明显;50 mV/mm 2 h组与100 mV/mm 2 h组凋亡细胞比例下降,其余组凋亡细胞比例均升高。结论小鼠成纤维细胞L 929细胞在不同的电场强度及作用时长下活性、衰老、凋亡状态各不相同,因此在研究电刺激对细胞的影响时,应充分考虑电刺激的强度及作用时间。其中,100 mV/mm 2 h的直流电刺激可以提高小鼠成纤维细胞L 929细胞的活性,抑制其衰老及凋亡。
- 李素廷洪莉闵洁汤剑明胡鸣李洋刘耀丹李倩男何松明杨将
- 关键词：电刺激细胞活性衰老凋亡
- 机械力对盆底成纤维细胞的双向作用被引量：5
- 2018年
- 目的:探讨机械力对盆底成纤维细胞双向作用。方法:收集2013年1月到2015年1月于我院因非盆腔器官脱垂患者行阴式全子宫切除的骶主韧带组织,原代培养成纤维细胞,根据机械力加载参数不同进行如下分组:(1)不加力对照组;(2)1mm 4h0.5Hz组;(3)4mm 4h0.5 Hz组。CCK-8法检测各组加力干预后细胞增殖活性,Western Blot检测各组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:不同力学参数加载人盆底成纤维细胞后,与对照组相比,1 mm 4h0.5 Hz组细胞增殖活性增强(188.22%±10.53%),4 mm 4h0.5 Hz组细胞增殖活性减弱(66.09%±4.06%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测各组中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平的变化,与对照组相比,1mm 4h0.5 Hz组的人盆底成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显上调(P<0.05,P<0.001),而4mm 4h0.5Hz组的人盆底成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显下调(P<0.001,P<0.05)。结论:机械力对盆底组织有损伤或修复的双向调控作用,其机制可能为机械力对盆底成纤维细胞具有促增殖或损伤双向调控作用,并双向调控Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白代谢。
- 李秉枢洪莉程丽薇闵洁刘耀丹汤建明
- 关键词：成纤维细胞盆腔器官脱垂
