黄婷婷
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- DNA疫苗免疫增强技术的比较研究
- 自1990首次发现肌肉注射DNA盐溶液后可自发转染肌细胞以来,DNA免疫已经有了巨大的发展。然而,简单的肌肉注射被认为是一种低效的免疫途径,现已有各种改进方法,其中最常用和最有效的就是电穿孔法和基因枪投递法。然而,这两者...
- 曾伟伟石星明王云峰王玫黄婷婷高宏博
- 文献传递
- 纹身法免疫增强DNA疫苗免疫效果的评价
- 2009年
- 为评价不同DNA免疫方法(皮内穿刺、肌肉注射)对DNA疫苗免疫效果的影响,将自行构建的表达传染性喉气管炎病毒gJ基因的真核表达载体pCDNA3.1-gJ和表达新城疫病毒F基因的真核表达载体pVAX1-F通过普通注射器裸DNA肌肉注射和纹身器皮下裸DNA纹身法投递,分别免疫BALB/c小鼠和SPF鸡,三免后2周用NDV强毒株进行攻毒。采集免疫后小鼠和鸡的血清,ELISA法检测抗体水平,并计算鸡攻毒后保护率,来评价这2种免疫途径的免疫效果。结果表明,纹身法皮下投递诱导的特异性免疫应答抗体水平显著高于DNA肌肉注射的抗体水平,而且通过纹身法投递质粒二免后产生的抗体水平显著高于肌肉注射三免后的抗体水平。此外,通过纹身法投递50μg质粒产生的抗体水平高于同一时期通过肌肉注射100μg质粒产生的抗体水平;攻毒试验表明,和肌肉注射免疫相比,纹身法皮肤免疫的免疫保护效果更佳。以上结果表明,纹身法皮下投递DNA疫苗,能诱导产生更强大的免疫应答,而且还是一种经济实用的方法,它将满足实验室条件下产生更快更强大免疫应答的需要,也为今后DNA疫苗免疫方法和途径研究提供新的思路。
- 曾伟伟石星明黄婷婷王玫高宏博孙妍李继松王云峰
- 关键词：DNA免疫DNA疫苗免疫途径
- 禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2010年
- 为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ku,具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白纯化后包被ELISA反应板,建立检测REV抗体的rgp90-ELISA方法。特异性试验结果表明该方法具有良好的特异性;将该方法与IDEXX公司生产的试剂盒共同检测包括63份已知背景的血清在内的黑龙江省和广东省的临床血清样品共477份,符合率分别为90.5%和86.4%。该方法的建立为禽群REV抗体的监测提供了方便、快捷、准确的技术手段。
- 石星明赵妍王玫张晶魏秀英杨桂花高宏博全炎铭黄婷婷张晓艳崔红玉王云峰
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒GP90基因真核表达
- 密码子优化增强新城疫病毒DNA疫苗的表达水平和免疫效果被引量：1
- 2009年
- 为提高新城疫病毒(Newcastl Disease Virus,NDV)F基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果。按照鸡体内偏嗜性密码子人工合成了NDV F48E9株的F基因optiF,插入到真核表达载体pVAX1中获得pVAX1-optiF。将F48E9株的F基因pVAX1-F与pVAX1-optiF分别转染COS-7细胞,72h后间接免疫荧光和Western blot检测细胞中瞬时表达的F蛋白。将质粒pVAX1、pVAX1-F和pVAX1-opti F以200μg/只的剂量分别股四头肌多点注射18只2周龄SPF鸡,2周后加强免疫1次,同时设立PBS对照。二免2周后每组取12只鸡以105EID50的F48E9株NDV强毒进行攻毒,评价这2种DNA疫苗的免疫效果。结果表明,F基因密码子的优化可显著提高NDVDNA疫苗诱导的保护性体液免疫和细胞免疫应答水平,攻毒后所有pVAX1-optiF免疫鸡均获得保护(12/12),而pVAX1-F组保护率只有17%(2/12)。DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。与未经修饰的F基因相比,修饰后的F基因体外瞬时表达水平明显提高。
- 曾伟伟石星明高宏博王玫黄婷婷李继松孙妍崔红玉童光志王云峰
- 关键词：DNA疫苗密码子优化F基因免疫保护
- 表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建被引量：8
- 2010年
- 为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。
- 高宏博崔红玉石星明赵妍赵晓岩全炎铭董鹏闫帅黄婷婷杨瑞王玫王云峰
- 关键词：禽流感病毒重组火鸡疱疹病毒HA基因
