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野生毛葡萄芪合成酶基因双向启动子活性分析被引量：3: 2016年; 【目的】研究中国野生毛葡萄‘丹凤-2’(Vitis quinquangularis‘Danfeng-2’)芪合成酶(stilbene synthase)基因双向启动子的启动活性与差异。【方法】通过染色体步移技术克隆中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因双向启动子,并与Uid A基因(β-葡萄糖苷酶基因,GUS)融合,利用真空渗透法在葡萄叶片中瞬时表达,组织化学染色和GUS蛋白定量法分别检测白粉菌接种、温度处理、茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸处理对双向启动子活性的影响。以毛葡萄‘丹凤-2’和欧洲葡萄‘赤霞珠’不同成熟时期果实的c DNA为模板,通过荧光实时定量PCR的方法分析Vq STS12/Vv STS31和Vq STS33/Vv STS32的表达情况。【结果】Pvq DSTS12受到白粉菌、茉莉酸甲酯、高温和低温的诱导后,启动活性增强,对水杨酸和脱落酸处理不敏感;Pvq DSTS33在茉莉酸甲酯处理下启动活性增强,在高温和低温的处理下启动活性降低,对水杨酸、脱落酸和白粉病处理不敏感。荧光实时定量PCR结果显示,在果实发育的6个时期中,‘丹凤-2’Vq STS12和Vq STS33的表达量均高于‘赤霞珠’Vv STS31和Vv STS32。4个基因的基本表达趋势为:浆果转色期之前持续增长,转色后期下降,浆果半熟期达到最高峰,浆果成熟期表达降低。其中毛葡萄‘丹凤-2’Vq STS12的表达量在转色后期并未降低且增加到上一时期的2.3倍;欧洲葡萄Vv STS32基因在成熟期表达量升高为前一时期的1.42倍。【结论】双向启动子活性的研究为利用植物天然双向启动子提供依据。; 和静李瑞民王跃进; 关键词：双向启动子 GUS

中国野生华东葡萄芪合成酶基因抗白粉病功能研究: 葡萄白粉病菌(Uncinula necator[Schw.]Burr.)是严重危害世界葡萄生产的重要真菌病害之一。高抗葡萄白粉菌的中国野生华东葡萄蕴藏着丰富的抗病基因资源,其携带的芪合成酶基因编码的代谢产物白藜芦醇,不仅...; 徐伟荣李瑞民马福利周起王跃进; 关键词：白粉菌白藜芦醇抗病

中国野生毛葡萄浆果中芪合成酶基因及其转录因子表达网络研究: 针对大部分欧洲葡萄芪类物质含量较低且不抗病的问题,基于中国野生葡萄芪合成酶基因表达调控的研究结果,通过转录组分析,最终构建以芪类物质合成基因为核心的信号转导—表达调控网络,解析芪合成酶基因及其芪类物质表达调控机理,为获得...; 李瑞民马福利王丹王磊王跃进; 关键词：品质基因转录因子; 文献传递

中国野生山葡萄VaERD15基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3: 2014年; 为探索中国野生山葡萄(Vitis amurensis)抗寒相关基因的抗寒作用机理,以中国野生山葡萄抗寒基因cDNA文库筛选的VaERD15基因(V.amurensis early responsive to dehydration 15)cDNA为模板,采用PCR扩增获得VaERD15基因的开放阅读框为423bp;通过构建pGEX-6p-1/VaERD15原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,经IPTG诱导表达出32.2kD的融合蛋白GST-VaERD15。该融合蛋白主要以包涵体表达形式存在,经0.1 mmol·L-1IPTG于37℃下诱导4h,其表达量最大;进一步用电透析法纯化融合蛋白,以纯化产物免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测结果表明其抗原-抗体免疫反应良好,获得的多克隆抗体能够用于VaERD15基因的功能分析。; 张剑侠翟焕牛茹萱李瑞民; 关键词：中国野生葡萄山葡萄原核表达多克隆抗体

中国野生毛葡萄‘丹凤-2’3个芪合酶基因表达与功能分析被引量：2: 2016年; 为了研究中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis Rehd.)‘丹凤-2’3个芪合酶基因的表达与功能,该研究采用同源克隆技术分离了毛葡萄‘丹凤-2’3个芪合酶基因VqSTS21、VqSTS30和VqSTS32(GenBank登录号分别为JQ868677、JQ868668和JQ868666),3个基因的cDNA全长均为1 179bp,编码392个氨基酸。以抗葡萄白粉病(Uncinula necator)的毛葡萄‘丹凤-2’和不抗病的欧洲葡萄‘赤霞珠’为材料分别进行接种白粉菌和ABA、SA、MeJA、高温、低温和高盐胁迫处理,利用实时定量PCR检测这3个基因在胁迫处理下的表达情况;同时利用农杆菌介导法将这3个基因分别转入模式植物烟草中,检测这3个基因在烟草中的表达产物,分析比较这3个基因的表达功能。结果显示:在2个供试材料中,葡萄白粉菌胁迫下芪合成酶VqSTS32诱导表达量高于VqSTS21和VqSTS30;在非生物胁迫处理下,芪合酶基因VqSTS32对高温处理反应最敏感。采用高效液相色谱分析检测转3个基因烟草的结果显示,转VqSTS32基因烟草比转VqSTS30基因烟草植株中白藜芦醇的累积量高。研究表明,3个基因中VqSTS32具有较高的抗葡萄白粉菌特性并能在转基因烟草中表达出较高的反式云杉新苷产物,这为进一步利用VqSTS32转目的植物葡萄基因研究提供了依据。; 杜杨建李瑞民程思妍张剑侠王跃进; 关键词：葡萄中国野生葡萄芪合酶基因白藜芦醇

野生华东葡萄脂类相关质体蛋白基因VpPAP1的克隆与表达被引量：3: 2014年; 该研究以前期获得的葡萄cDNA全长文库为基础,采用RT-PCR技术克隆了中国野生华东葡萄‘白河-35-1’(Vitis pseudoreticulata‘Baihe-35-1’)相关质体蛋白基因,命名为VpPAP1(GenBank登录号JN624817)。序列分析表明,VpPAP1基因cDNA编码区全长为1 034bp,其中5′-UTR和3′-UTR区域分别为26bp和63bp,开放阅读框为945bp,编码314个氨基酸,分子量为34 169.37Da,等电点为7.76。葡萄叶片接种白粉菌[Uncinula necator(Schw.)Burr.]后,运用实时定量PCR技术分析VpPAP1基因的表达模式,结果表明VpPAP1基因受白粉菌诱导表达,在接种后24h达到峰值。该研究为进一步研究中国野生葡萄脂类相关质体蛋白基因的表达及其在葡萄白粉病互作中的功能分析提供了依据。; 王欢史江莉李瑞民姚文孔焦韵桐王跃进; 关键词：葡萄白粉病

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