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分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析被引量：2: 2016年; 目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能。这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础。; 赵慧琳季晓飞张艳丽柏雪莲李娇娇陈醒醒张玉梅李波清; 关键词：幽门螺杆菌尿素酶 HSP60 分子伴侣相互作用

幽门螺杆菌hp0788基因对GES-1细胞功能影响的初步研究被引量：8: 2017年; 目的构建幽门螺杆菌ATCC26695hp0788基因敲除突变菌株(ATCC26695△0788km),观察hp0788基因对GES-1细胞功能的影响。方法以基因敲除质粒载体pSJHK构建基因敲除质粒,在hp0788基因的上下游分别扩增800~1100bp的基因片段作为同源臂,经限制性内切酶酶切后与质粒载体连接构建基因敲除质粒pSJHK-0788,通过电击转化构建hp0788基因敲除突变菌株,以FITC标记法检测其对GES-1细胞黏附能力的影响;以感染复数(MOI)为200:1构建幽门螺杆菌与GES-1细胞共培养体系,比较ATCC26695和ATCC26695△0788km对GES-1细胞凋亡及活性的影响。结果构建了hp0788基因双交换敲除质粒,电击转化获得hp0788基因敲除突变菌株。FITC标记ATCC26695和幽门螺杆菌ATCC26695△0788km与GES-1细胞混匀后采用流式细胞术检测FITC的荧光强度,ATCC26695组的黏附率记为100%,ATCC26695△0788km组黏附率为90.40%,差异均有统计学意义(t=2.80,P<0.05);ATCC26695与ATCC26695△0788km分别与GES-1细胞共培养8h和16h,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为(15.73±7.84)%、(25.26±5.81)%和(12.46±12.30)%、(21.13±10.09)%,细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞活力分别为53%、40%和66%、50%,差异均有统计学意义(t值分别为3.30,2.80,-2.93,-2.76,P<0.05)。结论hp0788基因敲除幽门螺杆菌ATCC26695对GES-1细胞的黏附率下降,并使GES-1凋亡率下降,而细胞活力增高。表明hp0788基因是影响幽门螺杆菌ATCC26695感染GES-1细胞后引起细胞凋亡和活性变化的重要基因。; 李娇娇荣倩玉季晓飞张莹赵慧琳周秀芝李波清; 关键词：幽门螺杆菌基因敲除细胞凋亡细胞活力

ILK对幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1凋亡的影响: 2018年; 目的探讨ILK在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1凋亡中的作用。方法体外培养GES-1细胞,随机分为空白对照组、Cpd22组和Hp组。采用罗丹明-鬼笔环肽检测不同浓度ILK抑制剂Cpd22对胃上皮细胞形态及细胞骨架改变的影响;Cpd22作用于GES-1细胞1h后,Western blot检测细胞内ILK表达情况;Hp与Cpd22作用1h的GES-1细胞共培养(MOI=100∶1)24h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP表达情况。结果与空白对照组相比,Cpd22浓度为2μmol/L时细胞形态变圆,间隙变大,细胞外缘伪足减少,细胞无法正常伸展。空白对照组与Cpd22组ILK相对表达量分别为0.83±0.01、0.74±0.01,比较差异有统计学意义(t=5.65,P<0.05)。空白对照组、Cpd22组、Hp组细胞凋亡率分别为(6.53±2.78)%、(21.13±5.60)%、(14.07±3.97)%,比较差异有统计学意义(t值分别为-5.52和-6.83,P<0.05);Caspase-3相对表达量分别为0.63±0.07、0.95±0.14、0.88±0.11,差异均有统计学意义(t值分别为-5.44和-5.88,P<0.05);PARP的相对表达量分别为1.17±0.07、0.93±0.16、1.09±0.12,差异有统计学意义(t值分别为3.32和3.46,P<0.05)。Cpd22与Hp共作用组细胞凋亡率为(30.37±5.17)%,Caspase-3的相对表达量为1.07±0.10,PARP的相对表达量为0.86±0.07,与Cpd22组比较差异均有统计学意义(t值分别为4.90、2.85和6.70,P<0.05)。结论抑制ILK表达可增强Hp诱导GES-1细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞骨架重排和Caspase-3的表达有关。; 徐正丁雲飞荣倩玉吴玉龙赵慧琳季晓飞张莹李波清; 关键词：幽门螺杆菌 GES-1细胞 ILK

一种幽门螺杆菌基因敲除载体质粒的构建方法: 本发明涉及生物基因工程领域中的基因敲除技术，特别涉及一种幽门螺杆菌基因敲除载体质粒的构建方法。选择<i>Helicobacter？pylori？</i>26695作为幽门螺杆菌基因敲除的研究菌株，...; 李波清季晓飞赵慧琳张莹; 文献传递

华支睾吸虫生长因子受体结合蛋白2的生物学特性和功能研究被引量：3: 2015年; 目的探索华支睾吸虫生长因子受体结合蛋白2(Clonorchis sinensis growth factor receptor bound protein 2,CsGrb2)的生物学特性和功能。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得CsGrb2的cDNA全长,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用MEGA5程序对来自于Genbank中与之有较高相似度的基因序列进行分析,构建基因进化树;原核表达重组融合蛋白CsGrb2,用表达的融合蛋白CsGrb2免疫小鼠,产生多克隆抗体,采用Western blot鉴定华支睾吸虫提取物中的天然CsGrb2,采用免疫组化法检测CsGrb2在华支睾吸虫成虫及囊蚴的分布;采用qRT-PCR测定CsGrb2基因在不同发育阶段的表达水平。结果 CsGrb2基因编码一个含有SH3-SH2-SH3结构的多肽,与人及各种动物的Grb2有着很高的相似度,与其他吸虫有着更近的进化关系;重组CsGrb2在原核系统中大量表达并纯化,Western blot显示天然CsGrb2与重组CsGrb2分子质量相同,均为34ku;CsGrb2在囊蚴中的表达量高于成虫。免疫组化显示CsGrb2主要分布于成虫的口、腹吸盘,间质组织,受精囊中的精子及囊蚴的大多数器官。结论CsGrb2属于保守蛋白,推测在华支睾吸虫的器官生成,能量代谢和精子的有丝分裂方面发挥作用。; 柏雪莲李波清张玉梅张珍耿丽杜镇镇赵慧琳; 关键词：华支睾吸虫能量代谢精子生成

整合素连接激酶对幽门螺杆菌所致细胞凋亡的影响: 2018年; 目的探讨整合素连接激酶对幽门螺杆菌(Hp)致胃癌细胞MGC-803凋亡的影响。方法实验分为空白对照组(胃癌细胞MGC-803正常条件培养),激动剂作用组(MGC803细胞与0.4μmol/L的整合素连接激酶激动剂LPTP共培养),Hp作用组(MGC803细胞与Hp(MOI值为100∶1)共培养)和激动剂加Hp作用组(MGC803细胞与0.4μmol/L的LPTP共培养1h,与Hp(MOI值为100∶1)共培养)。24h后流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP、Casepase-3的表达。结果激动剂作用组、Hp作用组、激动剂加Hp作用组细胞凋亡率分别为(23.45±1.484 92)%、(30.7±3.111 27)%、(16.15±1.202 08)%,与空白对照组(10.1±0.707 11)%比较,差异均有统计学意义(t值分别为-11.478,-9.131,-6.135,P<0.05);激动剂加Hp作用组与Hp作用组比较差异有统计学意义(t=6.169,P<0.05)。激动剂作用组、Hp作用组、激动剂加Hp作用组PARP蛋白相对表达量分别为0.89±0.57、1.245±0.21、0.87±0.057,与空白对照组0.6±0.06比较差异均有统计学意义(t值分别为-4.734,-13.492,-4.401,P<0.05);Casepase-3蛋白表达分别为0.78±0.35、1.32±0.04、0.87±0.45;与空白对照组0.47±0.07比较差异有统计学意义(t值分别为-5.635,-14.577,-8.037,P<0.05)。结论整合素连接激酶在Hp感染MGC-803细胞中起抗凋亡的作用。; 丁雲飞刘艺凝徐正荣倩玉吴玉龙季晓飞赵慧琳张莹李波清; 关键词：幽门螺杆菌整合素连接激酶细胞凋亡 MGC-803细胞

病原生物学与免疫学相融合的虚拟仿真综合实验设计与初步应用被引量：9: 2019年; 目的:探讨虚拟仿真综合实验与常规实验相结合的教学模式在免疫学教学中的应用效果。方法:以细菌抗原为中心、以免疫应答为主线将病原生物学、免疫学内容融合制作虚拟综合实验,对实验组学生进行虚拟系统与常规实验相结合的教学模式,对照组采用常规实验教学,运用期末考试成绩和问卷调查评价其教学效果。结果:实验组各项指标优于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:虚拟仿真综合实验与常规课堂实验相结合的教学模式有利于学生梳理知识脉络、拓展思维、加强理论与实践的结合。; 张珍胡涛杜镇镇耿丽赵慧琳; 关键词：免疫学病原生物学实验教学

CRM197修饰的肿瘤细胞裂解物疫苗抗肝癌作用研究: 2015年; [目的]探讨CRM197能否增强H22肝癌细胞裂解物疫苗的抗肿瘤活性。[方法]反复冻融H22细胞制备裂解物,与CRM197偶联,制备H22-CRM197疫苗,以小鼠皮下移植瘤模型考察疫苗抗肿瘤活性,并对免疫学机制进行探讨。[结果]与PBS组相比,H22-CRM197免疫显著降低了荷瘤小鼠肿瘤重量(0.53±0.20 g VS 2.04±0.43 g,p<0.01);与PBS组比较,H22-CRM197组小鼠免疫血清中检测到高滴度的抗-H22抗体(p<0.01);H22-CRM197免疫能够有效地刺激脾淋巴细胞的增殖并诱导产生了明显靶向H22细胞的细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用。[结论]CRM197可以显著增强H22肝癌细胞裂解物疫苗的抗肿瘤活性。; 张艳丽司春枫张玉梅赵慧琳徐茂磊李波清; 关键词：肝癌

幽门螺杆菌定植因子HpPrtC胶原蛋白酶的异源表达及其功能活性研究被引量：2: 2018年; 目的异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性。方法根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeI和XhoI酶切后构建原核表达载体pET-22b(+)-HpPrtC,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和层析法纯化重组蛋白,通过检测重组酶处理胶原蛋白后L-亮氨酸的产生量表征其胶原蛋白降解活性。结果 HpPrtC基因编码422个氨基酸,与已知PrtC家族蛋白酶氨基酸序列比对最高相似性<40%。克隆HpPrtC基因连接入表达质粒pET-22b(+),将测序正确的表达质粒pET-22b(+)-HpPrtC转化至感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达相对分子质量约为47×103的可溶性蛋白,与预期相符。经亲和层析纯化后的重组蛋白酶降解热变性I型胶原蛋白(可溶、不可溶)和天然I型胶原蛋白的活性分别为922.2±36.2、1168.8±65.6和674.0±13.4,与幽门螺杆菌培养液中胶原蛋白酶对可溶热变性I型胶原蛋白、不可溶热变性I型胶原蛋白和天然I型胶原蛋白活性分别为205.6±21.5、228.4±19.3和123.2±14.5一致。结论幽门螺杆菌定植因子HpPrtC为胶原蛋白酶。通过大肠埃希菌异源表达的重组HpPrtC蛋白具有胶原蛋白酶解活性,为探索该酶在幽门螺杆菌感染定植中的作用机制奠定了基础。; 赵慧琳吴玉龙荣倩玉徐正丁雲飞张玉梅乔媛媛李波清季晓飞; 关键词：幽门螺杆菌胶原蛋白酶异源表达胶原蛋白

泮托拉唑钠注射剂联合氯吡格雷片治疗急性心肌梗死伴消化道出血的临床研究被引量：48: 2017年; 目的观察泮托拉唑钠注射剂联合氯吡格雷片治疗急性心肌梗死伴消化道出血的临床疗效及安全性。方法将44例急性心肌梗死并消化道出血患者随机分为对照组22例和试验组22例。对照组予以氯吡格雷75 mg,qd,口服+奥美拉唑每次20 mg,bid,口服;试验组予以氯吡格雷75 mg,qd,口服+泮托拉唑钠40 mg,qd,静脉滴注。2组患者均治疗7d。比较2组患者的临床疗效、前列腺素E_2水平、心血管事件及药物不良反应的发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的总有效率分别为86.36%(19/22例)和59.09%(13/22例),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗3,5,7 d后,试验组的前列腺素E_2,水平分别为(81.03±18.48),(116.70±21.93),(149.93±27.52)ng·mL^(-1),对照组的前列腺素E_2水平分别为(67.09±15.20),(92.56±16.34),(120.08±20.05)ng·mL^(-1),差异均有统计学意义(P<0.001)。随访3个月,试验组和对照组的心血管事件发生率均为18.18%,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组发生的药物不良反应主要有便秘、过敏性皮炎、肾功能下降,对照组发生的药物不良反应主要有便秘和过敏性皮炎,且试验组和对照组的药物不良反应发生率分别为18.18%和13.64%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论泮托拉唑钠注射剂联合氯吡格雷片治疗急性心肌梗死伴消化道出血的临床疗效显著,可显著提高患者的血清前列腺素E_2水平,且不增加心血管事件和药物不良反应的发生率。; 乔月芹许洪伟王青赵慧琳; 关键词：急性心肌梗死消化道出血前列腺素E2

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赵慧琳

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