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赵永旭
作品数:
1
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供职机构:
上海交通大学医学院
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发文基金:
国家重点基础研究发展计划
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相关领域:
生物学
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合作作者
李伟
上海交通大学医学院
陈思
上海交通大学医学院
陈鑫
上海交通大学医学院
王毓美
上海交通大学医学院
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2015
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FKBP12蛋白RNA干扰与回复表达细胞系的建立
2015年
目的建立FKBP12蛋白(FK506 binding-protein 12,基因名FKBP1A)RNA干扰和回复表达的人肺癌细胞系A549,并初步探索FKBP12的功能。方法设计3条核心序列位于FKBP1A 3'UTR区域的siRNA,它们仅靶向内源性的FKBP12。利用p LKO.1-puro载体包装相应的shRNA慢病毒感染A549,得到FKBP12表达调低的细胞系。使用带neo基因筛选标记的pc DNA3.1载体回复表达FKBP12,并筛选得到不受shRNA干扰的回复表达细胞系。用实时荧光定量PCR和Western blotting检测调低和回复表达效果,并初步分析细胞系表型。结果 FKBP12在mRNA和蛋白质水平上的表达均被抑制,干扰效率在75%以上(P<0.01)。FKBP12不影响A549的细胞形态和增殖效率,而下调m TORC1(mammalian target of Rapamycin complex 1)下游转录调控相关蛋白4E-BP1(e IF4E-binding protein 1)的表达。结论成功构建了FKBP12蛋白敲低和回复表达的A549细胞系,为后续探究FKBP12的功能奠定了基础。
陈思
陈鑫
赵永旭
李伟
王毓美
关键词:
SIRNA
MTOR信号通路
A549
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