李建玲
- 作品数：32 被引量：203H指数：10
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：教育部跨世纪优秀人才培养计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小细胞肺癌细胞系NCI-H446蛋白质表达谱的建立被引量：22
- 2004年
- 背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳技术(IPG-DALT)分离NCI-H446细胞总蛋白,凝胶银染显色,ImageMaster2D图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶平均蛋白质点数为1506±74,匹配点数为1412±56,匹配率达93.4%,三块胶蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是(0.96±0.27)mm,在SDS-PAGE方向偏差是(1.24±0.41)mm。胶内酶解-肽质指纹图分析鉴定了58个蛋白质,其中有原癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:建立了小细胞肺癌细胞系NCI-H446双向电泳参考图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。
- 李茂玉肖志强李萃吴晓英冯雪萍易红李建玲陈主初陈平梁宋平
- 关键词：NCI癌细胞系蛋白质表达谱双向凝胶电泳固相PH梯度MALDI-TOF
- 大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK-1/2信号传导通路激活AP-1被引量：16
- 2003年
- 目的 探讨大鼠胃黏膜细胞EGFR活化AP -1的信号传导通路。方法 用EGFR配体TGF -α刺激分离的大鼠胃黏膜细胞 ,Westernblot和EMSA方法检测ERK -1/ 2信号传导通路的活化程度。结果 1nmol/LTGF -α刺激胃黏膜细胞 3 0min不仅显著诱导AP -1的活性 ,而且明显激活MEK和ERK -1/ 2 ;EGFR特异性抑制剂PD15 3 0 3 5或MEK特异性抑制剂PD980 5 9能完全阻断TGF -α诱导的胃黏膜细胞AP -1活化。结论 大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK -1/ 2信号传导通路激活AP -1。
- 李建玲易红冯雪萍陈主初肖志强
- 关键词：胃粘膜细胞EGFR
- 放疗诱导鼻咽癌细胞株CNE1热休克蛋白高表达被引量：7
- 2005年
- 目的鼻咽癌是一种以放射治疗为主的头颈肿瘤,但部分鼻咽癌对放疗耐受。为了解鼻咽癌放疗耐受机制,本实验拟初步探讨人高分化鼻咽癌细胞株CNE1放疗后的蛋白质改变。方法利用固相pH梯度二维凝胶电泳,建立CNE1放疗前后总蛋白质2DE图谱,利用MALDI TOF MS及数据库搜索初步分析和鉴定部分放疗前后差异蛋白质点。结果高分子量酸性蛋白质在CNE1放疗后20min高表达,其中大多为热休克蛋白质HSPs(heatshockproteins,HSPs)。结论放射能诱导CNE1的热休克蛋白高表达,它们可能与鼻咽癌放疗耐受有关。
- 冯雪萍陈主初肖志强易红李建玲杨轶轩王郁杰诸葛勤朱果张鹏飞肖健云王行炜
- 关键词：热休克蛋白类2-DE
- 长沙市艾滋病患者自杀意念的社会心理因素调查被引量：7
- 2017年
- 目的:了解长沙市艾滋病患者的自杀意念率及其影响因素,为降低艾滋病患者自杀意念制定科学依据。方法:采用自制的人口学量表、Zung氏抑郁量表、Zung氏焦虑量表及贝克自杀意念量表中文版对长沙市某专科医院的504名就诊或住院的艾滋病患者进行匿名现场问卷调查。结果:长沙市艾滋病患者最近1周、最严重时及终身自杀意念率分别为13.9%,26.6%和27.2%。同性恋(OR=4.79,2.66,2.37)及有过自杀未遂史(OR=8.56,5.63,5.56)是最近1周、最严重、终身3种自杀意念的危险因素。焦虑是最严重时(OR=3.28)及终身(OR=3.05)自杀意念的危险因素,抑郁是最近1周有自杀意念(OR=4.97)的危险因素。结论:长沙市同性恋艾滋病患者为存在自杀意念的高危人群,而有过自杀未遂史则为高危因素。
- 王慧莹王敏蒋芙蓉刘志胜王红红李建玲
- 关键词：艾滋病自杀意念
- 丙戊酸钠活化大鼠海马和额叶ERK-1/2信号传导通路被引量：8
- 2003年
- 为探讨慢性服用丙戊酸钠对中枢神经系统细胞外调控激酶 (ERK) 1/ 2信号传导通路活性的影响 ,阐明丙戊酸钠治疗躁狂抑郁症作用的可能分子机制 ,将 4 0只雄性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组 ,每组各 2 0只 .实验组大鼠用含丙戊酸钠的饲料喂养 ,对照组大鼠用常规饲料喂养 ,4周后取大鼠海马和额叶组织制备蛋白质样本 ,蛋白质印迹方法分析海马和额叶组织丝裂原活化的蛋白激酶激酶 (MEK)、ERK 1/ 2、MAPK活化的蛋白激酶 1(RSK1)、cAMP效应元件结合因子 (CREB)的磷酸化水平以及Bcl 2的表达水平 ,电泳迁移率变动分析(EMSA)方法分析海马和额叶组织激活蛋白 1(AP 1)的DNA结合活性 .与对照组比较 ,丙戊酸钠显著增强海马和额叶MEK、ERK 1/ 2、RSK1、CREB和AP1的活性 ,上调海马和额叶Bcl 2的表达 .结果表明 :慢性服用丙戊酸钠激活中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通路、上调中枢神经系统Bcl 2蛋白表达 。
- 李建玲汤参娥陈主初肖志强
- 关键词：丙戊酸钠海马额叶躁狂抑郁症精神病情绪稳定剂
- 转染LCRG1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质。方法:抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白。考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1075±43和1027±23,平均匹配率为91%。图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOFMS/MS鉴定了4个。对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质。结论:建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索。
- 章晓鹏肖志强陈主初李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞
- 关键词：喉肿瘤HEP-2细胞比较蛋白质组双向凝胶电泳差异表达蛋白
- 应用磷酸化蛋白质组学方法初步研究喉癌相关基因LCRG1的功能被引量：8
- 2005年
- mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因LCRG1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,LCRG1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究LCRG1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep-2/LCRG1细胞,仍表达LCRG1,且LCRG1具有显著的抑制细胞增殖的能力.抽提Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系总蛋白质,应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2DGE),结合抗酪氨酸磷酸化抗体的免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),鉴定酪氨酸磷酸化的蛋白质.得到了分辨率较高、重复性较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的总蛋白质双向凝胶电泳图谱;结合免疫印迹反应、软件分析和质谱技术识别并鉴定了13个差异反应的酪氨酸磷酸化的蛋白质.这些蛋白质参与了细胞信号传导和细胞代谢等过程.推测LCRG1可能是通过调节这些蛋白质的酪氨酸磷酸化、去磷酸化状态,参与细胞增殖、代谢和凋亡等过程的调控,而发挥抑瘤作用.这为全面、真实地揭示LCRG1抑瘤作用的分子机理提供了新思路.
- 章晓鹏肖志强李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞陈主初
- 关键词：双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS免疫印迹蛋白质印迹
- 人肺鳞癌组织的比较蛋白质组学研究被引量：17
- 2006年
- 目的利用蛋白质组学方法建立人肺鳞癌组织及其癌旁正常支气管上皮组织的差异蛋白质表达谱。方法对20例人肺鳞癌组织和配对的癌旁正常支气管上皮组织进行比较蛋白质组学研究,即利用双向凝胶电泳(2-DE)分离二者总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质。结果(1)比较分析20例肺鳞癌及正常配对组织的2-DE图谱,找到差异蛋白质点76个;(2)对68个差异蛋白质点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出一些与瘤基因、细胞周期调控、信号转导等有关的肺鳞癌相关蛋白;(3)肺鳞癌相关蛋白mdm2、c-Jun和表皮生长因子受体(EGFR)在人肺鳞癌组织中高表达,而在正常对照中均表达下调,与蛋白质组的分析鉴定结果是一致的。结论成功鉴定了68个肺鳞癌相关蛋白,为进一步筛选用于肺鳞癌诊断、治疗和预后评估的肺鳞癌分子标志物奠定了坚实的基础。
- 汤参娥李萃肖志强章晓鹏陈主初易红李建玲段朝军梁宋平
- 关键词：肺鳞癌组织蛋白质组学
- 人结肠上皮衰老相关蛋白质的筛选被引量：2
- 2005年
- 目的:筛选与人结肠上皮衰老相关的蛋白质以探讨人结肠上皮衰老及对癌症易感的分子机制。方法:应用双向凝胶电泳技术分离青年人及老年人的正常结肠上皮的总蛋白,经银染显色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图谱,搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:建立了青年人和老年人的正常结肠上皮的双向凝胶电泳图谱,质谱鉴定得到青年人和老年人之间的表达差异大于2倍的蛋白质点19个,包括17种非冗余蛋白质,它们的功能涉及物质代谢、能量产生、物质转运、抗氧化以及蛋白质的翻译、修饰和折叠等。结论:筛选并鉴定了17种结肠上皮衰老相关的蛋白质,提示线粒体功能受伤、抗氧化能力下降是结肠上皮衰老的重要原因,为揭示结肠上皮的衰老机制及衰老的结肠上皮对癌症易感的机制提供了线索。
- 朱果肖志强陈主初李建玲张鹏飞杨轶轩冯雪萍袁伟健
- 关键词：结肠上皮衰老癌症蛋白质组学
- 人支气管上皮不典型增生与浸润癌组织的比较蛋白质组学研究被引量：4
- 2004年
- 为筛选支气管上皮鳞状不典型增生进展的分子标志物 ,采用改良的脱氧胆酸 三氯醋酸 (deoxycholate trichloroaeticacid ,DOC TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质进行双向电泳 (two dimensionalelectrophoresis,2 DE) ,应用ImageMaster 2D分析软件、Student’st 检验识别差异蛋白质点 ,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assistedlaserdesorption/ionizationtime of flightmassspectrometry ,MALDI TOF MS)得到相应的肽质指纹图 (peptidemassfingerprint,PMF) ,搜索数据库鉴定差异蛋白质 .由此获得人支气管上皮不典型增生和浸润癌组织的 2 DE图谱及其凝胶的平均蛋白质点数 (12 73 0 0± 4 3 31,132 6 0 0± 6 6 6 3) ,且两阶段间平均差异蛋白质点数为 5 6 0 0± 8 96 .取 38个差异蛋白质点进行PMF分析 ,鉴定出一些与细胞生长、分化或肿瘤发生等有关的蛋白质 ,随即应用免疫组化检测差异蛋白质EGFR、c Jun、Mdm2在两类组织中的表达 ,其结果也显示了类似的表达差异 .支气管上皮不典型增生恶性转化过程中存在蛋白质的差异表达 ,这些差异蛋白质可能以不同的方式参与了癌变过程 ,且EGFR、c Jun、Mdm2的免疫组化验证结果与质谱结果的一致性表明 。
- 吴晓英陈主初肖志强李萃汪春年李建玲冯雪萍张鹏飞
- 关键词：比较蛋白质组学人支气管上皮差异表达蛋白质
