张大鹏
- 作品数：14 被引量：22H指数：3
- 供职机构：第二军医大学国际合作肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗CD20嵌和抗体的体外生物学活性研究被引量：2
- 2010年
- c8F6是我们实验室制备的一株抗CD20的鼠/人嵌合抗体。本研究对c8F6的体外生物学活性进行了测定并与临床上使用的CD20抗体Rituximab进行了比较。实验结果表明,c8F6具有与Rituximab相似的抗原结合活性,抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC),肿瘤细胞凋亡诱导活性及肿瘤细胞生长抑制作用。但c8F6的补体依赖性细胞毒作用(CDC)明显强于Rituximab,在10μg/ml浓度时c8F6对Daudi细胞和Raji细胞的杀伤率分别为91%和86%,而Rituximab的杀伤率分别为65%(Daudi细胞)和32%(Raji细胞)。研究结果提示,c8F6可能发展成为一个比Rituximab更为有效的用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤的抗体制剂。
- 杨扬张大鹏郭怀祖吴兰聂丽钱卫珠李博华
- 关键词：CD20B细胞非霍奇金淋巴瘤
- 人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定
- 2011年
- 利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增。CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测。结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95%的人IgE Fcε2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L)。提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础。
- 李晶郭怀祖杨扬钱卫珠张大鹏薛静亚朱磊王皓
- 关键词：IGE克隆表达CHO
- 抗CTLA-4嵌合抗体的制备及生物学活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 制备新型抗CTLA-4人鼠嵌合抗体并进行活性鉴定。通过杂交瘤技术获得高亲和力小鼠抗人CTLA-4单克隆抗体22G11和16C11;利用分子克隆技术将鼠源抗体可变区基因与人源抗体恒定区拼接后,最终通过CHO-K1工程株细胞表达高亲和力抗CTLA-4嵌合抗体。经SDS-PAGE电泳显示最终获得了纯度高于90%的CTLA-4嵌合抗体c22G11和c16C11,抗原结合活性结果表明两株嵌合抗体都能很好地与Jurkat细胞结合,竞争抑制实验表明它们都能与各自对应的鼠源抗体竞争。据此,本实验获得了两株抗人CTLA-4胞外区的高亲和力和特异性嵌合抗体。
- 许静李晶杨扬郭怀祖钱卫珠张大鹏王皓
- 关键词：CTLA-4单克隆抗体免疫原性嵌合抗体
- 双功能VEGF受体融合蛋白突变体的生物学活性研究被引量：1
- 2010年
- 为了研制出能同时阻断肿瘤血管与淋巴管生成的抗肿瘤制剂,我们设计构建了同时包含VEGFR1和VEGFR3功能域的基因工程双功能融合受体(VEGFRIg)。为了改善VEGFRIg的血浆半衰期以增强其抗肿瘤疗效,我们选择VEGFRIg的3个碱性氨基酸进行突变诱导获得了双功能受体的突变体VEGFRIgm。研究结果表明,VEGFRIgm具有与VEGFRIg相似的与VEGF-A和VEGF-C结合的能力,能有效地抑制VEGF-A诱导的人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF-C诱导的人皮肤淋巴内皮细胞增殖。进一步研究表明,VEGFRIgm在小鼠体内的半衰期比VEGFRIg显著延长,提示其可能发展成为一个新型的高效抗肿瘤药物。
- 王韬张大鹏杨扬许静石金平钱卫珠李博华魏于全王皓
- 关键词：血管内皮生长因子受体血管内皮细胞淋巴管内皮细胞半衰期抗肿瘤活性
- 抗CD3人源化抗体恒定区突变体的制备及其生物学活性被引量：1
- 2004年
- 为了降低抗CD3人源化抗体hu12F6对T细胞的激活作用以克服首剂效应 ,构建了恒定区特定位点突变的hu12F6重链表达载体 ,将其与hu12F6的轻链表达载体共转染CHO细胞 .ELISA和RT PCR证实 ,恒定区特定位点突变的人源化抗体hu12F6m在CHO细胞中获得了表达 .竞争抑制实验证实hu12F6m具有与原鼠源抗体及hu12F6相似的特异性和亲和力 .增殖实验表明hu12F6m对T细胞的刺激作用明显弱于hu12F6 .实验结果为深入探讨hu12F6m的生物学特性奠定了基础 .
- 李博华王皓杨扬陆斌王华菁张大鹏钱卫珠季军捷李晓东郭亚军
- 关键词：CD3人源化抗体定点突变首剂效应
- 抗CD20人源化抗体的制备及生物学活性鉴定被引量：4
- 2009年
- 在前期实验中,我们制备了一株抗CD20的嵌合抗体c8F6并证实其可有效杀伤CD20阳性的B淋巴瘤细胞。为了进一步降低c8F6的免疫原性,在研究中我们采用同源模建的方法模拟8F6的三维结构,通过分析其空间结构,确定可能影响抗体与抗原结合的框架区(FR)氨基酸残基,然后将鼠源抗体互补决定区(CDR)和FR区的关键氨基酸移植到人源模板上,构建出人源化抗体hu8F6。此人源化抗体除CDR区外,仅含有11个鼠源残基,但具有与嵌合抗体相似的亲和力和特异性。体外生物学功能实验进一步表明,hu8F6具有与c8F6相似的补体依赖的细胞溶解作用(CDC)和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),可有效杀伤人B淋巴瘤细胞Raji和Daudi,提示hu8F6有望发展成为一个用于B淋巴瘤治疗的低免疫原性抗体制剂。
- 杨扬张大鹏吴兰郭怀祖聂丽钱卫珠王皓李博华
- 关键词：人源化免疫原性同源模建
- 重组GluV8的克隆表达、纯化及酶学性质研究被引量：3
- 2014年
- 谷氨酰内切酶在生物制药及检测中应用较多,但来源受限,将全基因合成的金黄色葡萄球菌来源的谷氨酰内切酶功能区部分对应的基因进行改造后,克隆入表达载体pGEX-4T-2,导入E.coli BL21(DE3),重组蛋白以可溶性形式表达。采用亲和层析等纯化步骤对重组蛋白进行纯化,用底物Z-Phe-Leu-Glu-pNA(L-2135)对重组蛋白的酶学性质进行了研究,用HPLC、LC-MS/MS检测方法对酶切融合蛋白的位点特异性进行了鉴定。结果表明该酶的相对活性为1568U/mg,最适作用温度为42℃、最适作用pH为8.0,在pH 9.0,50℃时仍有较高的酶活,将该酶与胰酶酶切融合蛋白所得肽段结合能够提升质谱检测结果的精确度。以上结果表明该重组酶具有良好的应用前景。
- 段树燕郭怀祖李晶郑娟赵自叶张大鹏王皓
- 关键词：克隆酶学性质
- 新型可溶性双功能VEGF受体融合蛋白的抗肿瘤作用及其机理
- 肿瘤的生长有两个明显不同的阶段,即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段,血管生成使肿瘤能够获得足够的营养物质,是促成上述转变的关键环节。如果没有血管生成,原发肿瘤的生长不会超过1～2 mm~3。肿瘤侵袭转移是...
- 张大鹏
- 关键词：血管内皮生长因子受体肝癌血管生成淋巴管生成半衰期
- 文献传递
- 重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定
- 2015年
- 蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶Asp N所对应的基因克隆入表达载体p ET32a,导入E.coli BL21(DE3),首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达,亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶Asp N具有与标准品基本一致的酶切活性,能够较好地应用于生物和制药领域。
- 郑娟郭怀祖李晶段树燕赵自叶张大鹏郭尚敬王皓
- 关键词：原核表达纯化活性鉴定
- 天然小分子抗体研究进展被引量：3
- 2012年
- 与传统意义上的由两条重链和两条轻链组成的单体抗体不同,天然小分子抗体是指在自然界中存在的一些奇特的小分子抗体,它们分子量比较小,有的仅由重链组成,有的仅由轻链组成。在骆驼体内发现的仅由重链组成的抗体可以发挥正常的生物学功能,克隆其可变区即获得具有抗原结合能力的纳米抗体(Nanobody)。鲨鱼体内也存在一种由重链同源二聚体组成的非典型抗体IgNAR。另外,在人体内也存在游离的轻链抗体(FLC),在疾病的发生诊断中具有重要意义。本文综述了Nanobody、IgNAR及FLC的结构特点与作用机制。
- 朱磊张大鹏
- 关键词：鲨鱼NANOBODY游离轻链
