孙平
- 作品数:7 被引量:13H指数:2
- 供职机构:武汉大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金:湖北省自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域:医药卫生文化科学生物学更多>>
- 医学免疫学教学改革的实践与思考被引量:10
- 2012年
- 对于现在的医学免疫学教学模式,教育工作者需要不断摸索教学改革,更新教学观念。我院从去年起经过一年多的酝酿和实践,以芝加哥大学免疫学系的改革模式为模板,兼顾学生就业工作的实际情况,逐渐摸索出一系列适合我院学生的改革措施。相信教学改革将激发学生学习的主动性和创新性,培养综合能力,有益于后续课程的学习。
- 熊洁刘胜武孙平曹晓春蒋正明张秋萍
- 关键词:医学免疫学教学改革教学模式
- 携带结核杆菌Ag85B、ESAT6的减毒伤寒沙门氏菌载体疫苗的研究
- 结核病(Tuberculosis,TB)是一种由结核杆菌感染引起的严重危害人类健康的传染病。据世界卫生组织(WHO)统计资料显示,全球有近1/3的人感染结核杆菌,每年有300万人死于结核病,每年新发病人数达800~100...
- 王其龙王坤孙平刘胜武章晓联
- 文献传递
- 人DC-SIGN的原核表达载体的构建、重组蛋白的表达纯化和鉴定
- 2008年
- 目的:获得纯化的DC-SIGN蛋白,为揭示DC-SIGN参与抗原提呈的机制,探讨宿主细胞DC-SIGN蛋白和HIV、HCV、结核杆菌等病原体的相互作用机制奠定基础。方法:人DC-SIGN的cDNA克隆到pGEX-KG表达载体上,转化入E.coli中,通过IPTG诱导,过度表达GST-DC-SIGN融合蛋白,并使用Glutathione-Sepharose 4B亲和层析柱提取得到纯化的DC-SIGN蛋白,最后通过SDS-PAGE和Western Blot方法进行检测和鉴定。结果:酶切鉴定证实DC-SIGN基因已插入原核表达载体pGEX-KG。重组表达质粒pGEX-KG-DC-SIGN在大肠杆菌BL21中成功表达了DC-SIGN融合蛋白,其分子质量约为44 kU。结论:成功构建DC-SIGN原核表达重组质粒,并提取纯化出DC-SIGN原核蛋白,为下一步研究DC-SIGN的功能奠定了基础。
- 曾洁周从良孙平曹晓春章晓联
- 关键词:WESTERNBLOT
- Establishment of a novel ManLAM-aptamer for rapid, sensitive and specific diagnosis of Mycobacterium tuberculosis
- 王其龙李明潘勤孙平章晓联
- 人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2009年
- 目的:构建人CD59真核及原核表达质粒,并制备抗人CD59多克隆抗体,以用于研究糖蛋白CD59生物学功能。方法:用RT-PCR技术从人PBMCs中获取hCD59全长及其胞外区hsCD59cDNA序列,分别克隆至pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体。重组融合蛋白GST-hsCD59由经IPTG诱导的大肠杆菌BL21表达后纯化并鉴定。用pVAX-1-hCD59质粒免疫家兔并用纯化的GST-hsCD59融合蛋白加强免疫制备兔抗人CD59多克隆抗体并测定其效价。结果:成功构建人CD59真核表达质粒pVAX-1-hCD59和原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59。融合蛋白GST-hsCD59在大肠杆菌中高效表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值一致。制备的兔抗人CD59多克隆抗体效价为1∶3200。结论:成功地构建了重组真核表达质粒pVAX-1-hCD59及原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59,获得了兔抗人CD59多克隆抗体,这将有助于我们深入研究CD59在人类疾病中的生物学功能。
- 唐洁孙平章晓联
- 关键词:克隆多克隆抗体
- Ficolin-A的克隆、蛋白表达和抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的:克隆小鼠ficolin-A(mouse ficolin-A)基因,构建在真核及原核表达载体,并在大肠杆菌中表达和鉴定其蛋白,并制备其抗体,以进一步用于研究小鼠ficolin-A的功能。方法:用RT-PCR的方法从新生7 d的C57BL/6小鼠肝脏中运用GeneRacer kit扩增ficolin-A cDNA片段,并将该片段分别插入pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合,在IPTG的诱导下在大肠杆菌中表达。用GST-Sepharose 4B的柱子对表达的融合蛋白进行纯化,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。制备ficolin-A的多克隆抗体并对其效价进行测定。结果:成功地构建了pVAX-1-ficolin-A真核表达载体及pGEX-KG-ficolin-A原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致。并且成功制备了多克隆抗体。结论:成功地构建了重组表达载体pVAX-1-ficolin-A及pGEX-KG-ficolin-A,并在E.coliBL21中表达了ficolin-A蛋白,为下一步研究小鼠ficolin-A的功能奠定了基础。
- 周菁孙平章晓联
- 关键词:基因克隆蛋白表达抗体
- DC-SIGN特异性适配子的筛选及鉴定被引量:3
- 2008年
- 目的:筛选高特异性、高亲合力结合DC-SIGN的单链DNA适配子,为开发抗HIV、HCV和结核杆菌感染的新型预防和治疗试剂奠定基础。方法:采用基于细胞表面展示的SELEX技术(TECS-SELEX),筛选出具有高亲合力结合DC-SIGN的单链DNA(ssDNA)适配子;运用流式细胞术(FCM)检测该适配子的亲合力;对最高亲合力适配子库进行克隆和测序;ELISA和FCM方法检测单适配子ZD8与DC-SIGN蛋白结合的剂量相关性;MTT法测定IC50观察适配子对细胞的毒性。结果:第14轮筛选的适配子库亲和力最高;DC-SIGN抗体能抑制适配子结合表达DC-SIGN蛋白的细胞;第14轮库中筛选的单适配子ZD8与DC-SIGN蛋白的结合率呈剂量依赖性;所筛选的单适配子对肝细胞几乎无毒性。结论:成功筛选出DC-SIGN蛋白的ssDNA适配子,为防治HIV、HCV和结核杆菌感染等DC-SIGN相关性疾病,提供新型预防和治疗的候选试剂和小分子药物。
- 陈芳曾洁孙平潘勤章晓联
- 关键词:DC-SIGN适配子